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一種蘇丹草種子組織培養技術.pdf

關 鍵 詞:
一種 蘇丹 種子 組織培養 技術
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摘要
申請專利號:

CN201210522552.X

申請日:

20121207

公開號:

CN102972298B

公開日:

20130911

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00 主分類號: A01H4/00
申請人: 安徽科技學院
發明人: 李杰勤,王麗華,詹秋文,胡能兵,林平,王世建,楚利
地址: 233100 安徽省滁州市鳳陽縣東華路9號
優先權: CN201210522552A
專利代理機構: 代理人:
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201210522552.X

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

一種蘇丹草種子組織培養技術屬于生物技術領域,其主要過程有:種子消毒、震蕩浸泡、愈傷組織誘導培養、愈傷組織繼代培養、愈傷組織分化培養、小苗煉苗培養。

權利要求書

1.一種蘇丹草種子組織培養方法,其特征在于,它包括以下步驟:①種子消毒:將蘇丹草種子放在自來水下沖洗5-10?min,在超凈工作臺上,用70%酒精處理30s,輕輕攪動,然后放入0.1%升汞中處理15?min后,無菌水沖洗4-5次;②振蕩浸泡:將消毒種子轉入盛有無菌水的小三角瓶中,放在振蕩器上振蕩12?h左右;③愈傷組織誘導:在超凈工作臺上用消毒小刀將上述處理好的種子切成兩塊,并接種在愈傷組織誘導培養基中,每瓶接種半粒的種子4塊,放入培養室培養;④愈傷組織誘導培養基配方:MS基本培養基加入2,4-D?0.5mg/L,培養室溫度為25±1℃,光源為40W日光燈,光照時間12h/d;⑤將誘導的愈傷組織再接種到繼代培養基中培養;⑥繼代培養基配方:MS培養基加2,4-D?1.0mg/L;⑦在繼代培養基中培養15天左右,將蘇丹草愈傷組織轉入到分化培養基中;⑧分化培養基配方:MS培養基加入6-BA?2.0mg/L;⑨在分化培養基中培養40天左右,使之長成正常的小植株;⑩將小植株轉移到裝有蛭石營養缽中,將其放入25℃培養箱煉苗一周左右即可移栽。

說明書

技術領域

一種蘇丹草種子組織培養技術屬于生物技術領域,更具體的說是一種利用蘇丹草的種子為外植體進行組織培養的技術。

背景技術

蘇丹草為禾本科高粱屬一年生植物,原產于非洲的蘇丹,因其飼草產量高,再生能力強,營養價值豐富,適應范圍廣等優點,在我國大部分地區都有栽種。組織培養是指在無菌條件下利用人工培養基對植物組織進行培養,是生物工程研究的基礎,是進行遺傳轉化和植物改良研究的基本環節。相比利用幼穗、葉、莖等為外植體的組織培養方法,以種子為外植體進行組織培養具有不受季節限制和取材方便的優點。目前,以蘇丹草種子為外植體的組織培養的技術還未見報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種以蘇丹草種子為外植體的組織培養技術,為深入進行遺傳轉化和性狀改良提供研究平臺。

本發明是這樣實現的:

一種蘇丹草種子組織培養技術包括以下步驟:

①種子消毒:將蘇丹草種子放在自來水下沖洗5-10?min,在超凈工作臺上,用70%酒精處理30s(輕輕攪動),然后放入0.1%升汞中處理15?min后,無菌水沖洗4-5次;

②震蕩浸泡:將消毒種子轉入盛有無菌水的小三角瓶中,放在振蕩器上振蕩12?h左右;

③愈傷組織誘導:在超凈工作臺上用消毒小刀將上述處理好的種子切成兩塊,接種在愈傷組織誘導培養基中,每瓶接種半粒種子4塊,放入培養室培養;

④愈傷組織誘導培養基配方:MS基本培養基加入2,4-D?0.5mg/L。培養室溫度(25±1)℃,光源為40W日光燈,光照時間12h/d;

⑤將誘導的愈傷組織再接種到繼代培養基中培養;

⑥繼代培養基配方:MS培養基加2,4-D?1.0mg/L;

⑦在繼代培養基中培養15天左右,將蘇丹草愈傷組織轉入到分化培養基中;

⑧分化培養基配方:MS培養基加入6-BA?2.0mg/L;

⑨在分化培養基中培養40天左右,使之長成正常的小植株;

⑩將小植株轉移到裝有蛭石營養缽中,將其放入25℃培養箱煉苗一周左右即可移栽。

本發明的有益效果:

一種以蘇丹草種子為外植體的組織培養技術可以為深入進行蘇丹草的遺傳轉化和性狀改良提供研究平臺。例如在組織培養的環節中,可以對愈傷組織進行化學誘變,也可以對培養體進行染色體加倍,還可以對愈傷組織進行優良基因的導入接種,進行轉基因研究等等。通過這些手段,可以高效快速的培育出具有各種優異性狀的蘇丹草新品種。

具體實施方式

具體實施方式舉例1,蘇丹草品系722種子的組織培養

①種子消毒:將蘇丹草種子放在自來水下沖洗10?min,在超凈工作臺上,用70%酒精處理30s(輕輕攪動),然后放入0.1%升汞中處理15?min后,無菌水沖洗5次;

②震蕩浸泡:將消毒種子轉入盛有無菌水的小三角瓶中,放在振蕩器上振蕩12?h;

③愈傷組織誘導:在超凈工作臺上用消毒小刀將上述處理好的種子切成兩塊,接種在愈傷組織誘導培養基中,每瓶接種半粒種子4塊,放入培養室培養;

④愈傷組織誘導培養基配方:MS基本培養基加入2,4-D?0.5mg/L。培養室溫度(25±1)℃,光源為40W日光燈,光照時間12h/d;

⑤將誘導的愈傷組織再接種到繼代培養基中培養;

⑥繼代培養基配方:MS培養基加2,4-D?1.0mg/L;

⑦在繼代培養基中培養15天,將蘇丹草愈傷組織轉入到分化培養基中;

⑧分化培養基配方:MS培養基加入6-BA?2.0mg/L;

⑨在分化培養基中培養40天,使之長成正常的小植株;

⑩將小植株轉移到裝有蛭石營養缽中,將其放入25℃培養箱煉苗8天移出室外定植。

具體實施方式舉例2,蘇丹草品系Sa種子的組織培養

①種子消毒:將蘇丹草種子放在自來水下沖洗10?min,在超凈工作臺上,用70%酒精處理30s(輕輕攪動),然后放入0.1%升汞中處理15?min后,無菌水沖洗5次;

②震蕩浸泡:將消毒種子轉入盛有無菌水的小三角瓶中,放在振蕩器上振蕩12?h;

③愈傷組織誘導:在超凈工作臺上用消毒小刀將上述處理好的種子切成兩塊,接種在愈傷組織誘導培養基中,每瓶接種半粒種子4塊,放入培養室培養;

④愈傷組織誘導培養基配方:MS基本培養基加入2,4-D?0.5mg/L。培養室溫度(25±1)℃,光源為40W日光燈,光照時間12h/d;

⑤將誘導的愈傷組織再接種到繼代培養基中培養;

⑥繼代培養基配方:MS培養基加2,4-D?1.0mg/L;

⑦在繼代培養基中培養15天,將蘇丹草愈傷組織轉入到分化培養基中;

⑧分化培養基配方:MS培養基加入6-BA?2.0mg/L;

⑨在分化培養基中培養40天,使之長成正常的小植株;

⑩將小植株轉移到裝有蛭石營養缽中,將其放入25℃培養箱煉苗10天,移出室外定植。

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