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一種銀杏內酯B組合物及其制備方法.pdf

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一種 銀杏 內酯 組合 及其 制備 方法
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摘要
申請專利號:

CN201310098470.1

申請日:

20130326

公開號:

CN103142472A

公開日:

20130612

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61K9/08,A61K31/365,A61K47/34,A61P9/10,A61P9/00,A61P7/02,A61P29/00,A61P37/06,A61P43/00 主分類號: A61K9/08,A61K31/365,A61K47/34,A61P9/10,A61P9/00,A61P7/02,A61P29/00,A61P37/06,A61P43/00
申請人: 山東羅欣藥業股份有限公司
發明人: 孫亞東,王金星,李俊廣,牛洪芬
地址: 276017 山東省臨沂市羅莊區羅七路
優先權: CN201310098470A
專利代理機構: 北京元中知識產權代理有限責任公司 代理人: 王明霞
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法律狀態
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CN201310098470.1

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摘要

本發明涉及一種銀杏內酯B組合物,所述組合物為銀杏內酯B注射液,按重量份計,所述銀杏內酯B注射液包括以下藥物活性成分:銀杏內酯B提取物20份、聚乙二醇-400580-630份、甘油770-830份以及乙醇640-700份;所述銀杏內酯B提取物從銀杏葉中提取獲得,所述銀杏內酯B提取物中含有銀杏內酯B和銀杏內酯A,所述銀杏內酯B的含量大于99%,所述銀杏內酯A的含量小于0.4%。本發明提供的銀杏內酯B組合物中,作為原料藥的銀杏內酯B提取物中銀杏內酯B的純度高,銀杏內酯A的含量極低,滿足了注射劑對原料藥的要求,提高了原料藥的生物利用度以及患者的用藥安全。

權利要求書

1.一種銀杏內酯B組合物,其特征在于,所述組合物為銀杏內酯B注射液,按重量份計,所述銀杏內酯B注射液包括以下藥物活性成分:銀杏內酯B提取物20份、聚乙二醇-400580-630份、甘油770-830份以及乙醇640-700份;所述銀杏內酯B提取物從銀杏葉中提取獲得,所述銀杏內酯B提取物中含有銀杏內酯B和銀杏內酯A,所述銀杏內酯B的含量大于99%,所述銀杏內酯A的含量小于0.4%。2.根據權利要求1所述的組合物,其特征在于,所述銀杏內酯B注射液包括銀杏內酯B20份、聚乙二醇-400590-610份、甘油790-810份以及乙醇650-670份。3.根據權利要求2所述的組合物,其特征在于,所述銀杏內酯B注射液包括銀杏內酯B20份、聚乙二醇-400600份、甘油800份以及乙醇660份。4.根據權利要求1所述的組合物,其特征在于,所述銀杏內酯B注射液的pH為3.8-4.8。5.根據權利要求1所述的組合物,其特征在于,所述銀杏內酯B的含量大于99.6%,所述銀杏內酯A的含量低于0.3%。6.根據權利要求1所述的組合物,其特征在于,所述銀杏內酯B提取物中不含白果內酯。7.根據權利要求1所述的銀杏內酯B注射液,其特征在于,所述銀杏內酯B提取物中總銀杏酸的含量小于0.12ppm。8.根據權利要求1或6或7任一項所述的組合物,其特征在于,所述銀杏內酯B提取物的甲醇溶液在20℃時的比旋度為-57°~-61°。9.一種權利要求1-8任一項所述的銀杏內酯B組合物的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:(1)稱取處方量的聚乙二醇-400、等質量的乙醇,攪拌均勻,加入處方量的銀杏內酯B提取物,加熱至50~60℃,攪拌溶解,加入處方量的甘油,用含9-11%鹽酸的乙醇溶液調pH值至3.8~4.8,加乙醇至處方量的全量;(2)加入配液量0.1-0.3%g/ml的活性炭,攪拌25-35分鐘,粗濾脫炭;(3)過0.22μm濾膜,得精濾液;(4)灌封;(5)118-125℃熱壓滅菌13-18分鐘,檢驗,包裝,入庫。

說明書

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域,具體涉及一種銀杏內酯B組合物及其制備方法。

背景技術

銀杏內酯B,英文名Ginkgolide?B;分子式:C20H24O10;分子量:424.40;結構式為:

銀杏內酯B是一種活性強的血小板活化因子(PAF)拮抗劑,能競爭性地與PAF受體結合,抑制PAF的作用;因此,凡涉及與PAF相關的病癥,如:血栓形成、腦組織損傷、器官移植排斥、急性炎癥、心臟過敏、細胞內毒素及IgG導致的休克等,銀杏內酯B均有一定療效。

但迄今為止,國內外均未有銀杏內酯B單一成分為原料的制劑上市。根據我國《藥品注冊管理辦法》中化學藥品注冊分類該藥品屬于化學藥品中“未在國內外上市銷售的藥品”下的“天然物質中提取或者通過發酵提取的新的有效單體及其制劑”,屬于化學藥品1.2類。

CN101182325A涉及一種靜脈給藥銀杏內酯B及提取方法,其中銀杏內酯B含量≥97%,銀杏酸≤2PPM,白果內酯未檢出,可以直接作為靜脈注射或靜脈滴注原料藥;提取采用葉干重8~25倍量、濃度為5%-30%乙醇水溶液回流提取若干次,過濾分離;將濾液濃縮至原體積的0.05~0.2倍量,加入吸附劑在攪拌狀態下充分吸附,過濾,濾餅用3~10倍量乙醇回流提取若干次,合并提取液,濃縮至原體積的0.01~0.2倍量,靜置析晶,過濾得銀杏內酯;銀杏內酯用10~50倍量的甲醇進行重結晶若干次,析晶溫度-10℃~-25℃,過濾結晶、干燥,得銀杏內酯B。

CN101412725A公開一種從銀杏葉中提取分離銀杏內酯B的方法,其步驟如下:1)取銀杏葉,用由高到低不同濃度的乙醇進行提取,合并提取液,回收乙醇,得到濃縮后的提取液;2)向濃縮后的提取液中加入乙酸乙酯萃取,回收有機相后濃縮至浸膏;3)將步驟2)所得浸膏稀釋后上選擇性極性無孔吸附樹脂柱,用乙醇洗脫,所得洗脫液回收乙醇后,再用乙醇結晶得到銀杏內酯類化合物;4)將銀杏內酯類化合物結晶上硅膠柱,用正己烷和乙酸乙酯的混合液洗脫,收集洗脫液,得到富集銀杏內酯B的洗脫液;5)回收步驟4)中收集的洗脫液中的溶劑,再用乙醇結晶,得到銀杏內酯B單體。

CN1680392A涉及采用高速逆流色譜法(HSCCC)從銀杏葉中分離一種高純度銀杏內酯的制備方法。用三個溶劑體系,分別經過兩次HSCCC分離后,可得到銀杏內酯A、銀杏內酯B、銀杏內酯C、銀杏內酯J和白果內酯,純度均達到99%以上。

目前,藥用的銀杏內酯B主要從銀杏葉中提取,但由于銀杏內酯B在銀杏葉中的含量極低,且銀杏內酯B與銀杏內酯A以及銀杏酸、白果內酯共同存在,銀杏內酯B與銀杏內酯A的結構又極為相似,極性差異很小,從銀杏葉中提取高純度的銀杏內酯B單體較為困難,特別是將銀杏內酯B與銀杏內酯A的分離較為困難。上述專利以及現有技術中提取的銀杏內酯B的純的不夠高,且銀杏內酯B溶解性差,因此只能作為口服用藥原料而不能作為注射劑的原料藥,而口服給藥的生物利用度較低,不能充分發揮銀杏內酯B的藥效,采用注射劑可極大提高其生物利用度,且臨床適用人群——缺血性腦病病人,包括急性缺血性中風腦梗塞的病人治療時間窗窄,且需快速起效,一般口服制劑相對于注射劑起效慢,而制成注射劑后給藥起效迅速,另外,缺血性腦病病人可能會存在口服藥物吞咽困難,制成注射劑則不存在吞咽困難的問題。但注射劑對銀杏內酯B的純度要求非常高,現有技術中的銀杏內酯B原料藥因為純度低無法用于制備銀杏內酯B的注射液。

有鑒于此,特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于克服現有技術的不足,提供一種銀杏內酯B組合物,該注射液中銀杏內酯B提取物的含量高、銀杏內酯A的含量極低。

本發明的第二目的在于提供一種上述銀杏內酯B組合物的制備方法。

為了實現本發明的目的,特采用如下技術方案:

一種銀杏內酯B組合物,所述組合物為銀杏內酯B注射液,按重量份計,所述銀杏內酯B注射液包括以下藥物活性成分:銀杏內酯B提取物20份、聚乙二醇-400580-630份、甘油770-830份以及乙醇640-700份;所述銀杏內酯B提取物從銀杏葉中提取獲得,所述銀杏內酯B提取物中含有銀杏內酯B和銀杏內酯A,所述銀杏內酯B的含量大于99%,所述銀杏內酯A的含量小于0.4%。

一般口服制劑相對于注射劑起效慢,而制成注射劑后給藥起效迅速。缺血性腦病病人可能會存在口服藥物吞咽困難,制成注射劑則不存在吞咽困難的問題。用于注射劑的原料藥對純度要求極高,本發明提供的注射液中,原料藥銀杏內酯B提取物中銀杏內酯B的純度高,銀杏內酯A的含量極低,滿足了注射劑對主要的藥物活性成分純度高的要求,極大地提高了患者的用藥安全,另外,微量的銀杏內酯A與銀杏內酯B的協同、累加、互補作用強,相比于單一的銀杏內酯B,其生物利用度更高。

甘油可作為一種能量酸,對于進行高強度體能訓練的人,會給他們帶來更出色的表現。對于健美運動員來說,甘油能幫助他們把體表及皮下的水分轉移到血液和肌肉中。甘油在穩定血糖和胰島素方面具有重要的作用,大劑量的服用甘油幾乎不會對血糖及胰島素水平有影響。大量的證據提示,如果你的目標是減少碳水化合物的攝入量,甘油可能是一種理想的糖原。

銀杏內酯B的溶解性能不好,本發明以甘油、乙醇和聚乙二醇-400為溶劑,但甘油粘度大,本發明中甘油的用量相對較小,另外,銀杏內酯B在溶劑粘度較大的情況下不易分散溶解,在聚乙二醇-400中的溶解度相對較大,因此采用聚乙二醇-400和乙醇先溶解銀杏內酯B后再加入甘油。

本發明提供的銀杏內酯B提取物是從天然藥物銀杏葉中提取、分離、精制而成的,所述銀杏內酯B的含量大于99%,銀杏內酯A的含量小于0.4%,銀杏內酯B的含量極高,將其制成注射劑,極大地提高了銀杏內酯B的生物利用度,且本品的質量研究和穩定性試驗結果表明本品質量可控、穩定,為本品臨床應用提供良好的有效性和安全性和質量可控性的基礎,大大地提高了患者的用藥安全。

優選的,所述銀杏內酯B注射液包括銀杏內酯B提取物20份、聚乙二醇-400590-610份、甘油790-810份以及乙醇650-670份。

更優選的,所述銀杏內酯B注射液包括銀杏內酯B提取物20份、聚乙二醇-400600份、甘油800份以及乙醇660份。

優選的,所述注射液的pH為3.8-4.8。

優選的,所述銀杏內酯B的含量大于99.6%,所述銀杏內酯A的含量低于0.3%。

優選的,所述銀杏內酯B提取物中不含白果內酯。

優選的,所述銀杏內酯B提取物中總銀杏酸的含量小于0.12ppm。

本發明提供的銀杏內酯B提取物中,雜質的種類少、含量低,質量可控,是一種性能優良的注射制劑的原料藥,且雜質對銀杏內酯B的穩定性的影響較小。

銀杏內酯A與銀杏內酯B都是對人體有益的藥物活性成分,但作為注射劑的原料藥,其中主要活性成分銀杏內酯B的含量應非常高,銀杏內酯A與銀杏內酯B的結構極為相似,二者極性差異很小,從銀杏葉中提取的銀杏內酯B提取物中,銀杏內酯A的含量較高,要獲得高含量的銀杏內酯B較為困難。本發明提取的銀杏內酯B提取物中銀杏內酯A的含量非常低,有效地將銀杏內酯A從銀杏內酯B中分離了出來,得到的銀杏內酯B含量非常高,并且,銀杏內酯B提取物中雜質的種類和含量對銀杏內酯B的穩定性也有較大影響,本發明提供的銀杏內酯B提取物的雜質種類少、含量低,相對于現有技術具有更好的穩定性,可作為注射制劑的原料藥,極大地提高了患者的用藥安全。

本發明參考《中國藥典》2010年版一部銀杏葉提取物項下總銀杏酸限度測定方法,對原料測定的結果表明,本品含總銀杏酸的量小于0.12ppm,遠低于銀杏葉提取物總銀杏酸不得過百萬分之十的限度規定,本發明提供的銀杏內酯B提取物是安全而有效的。

本發明中,所述銀杏內酯B提取物的甲醇溶液在20℃時的比旋度為-57°~-61°。

銀杏內酯B在無水乙醇下的溶解度較甲醇低,配制成10mg/ml的濃度較困難,而5mg/ml的旋光度數值較低,誤差增大,因而選用甲醇為溶劑,配制成10mg/ml的溶液,在20℃時測定的比旋度為-57°~-61°。本發明的銀杏內酯B的比旋度比《中國藥典》中規定的銀杏內酯B的比旋度為-48°至-63°的范圍窄了很多,說明本發明提供的銀杏內酯B提取物具有非常高的純度。

本發明還提供了一種所述的銀杏內酯B提取物的制備方法,包括:

(1)在攪拌條件下向乙酸乙酯中先加入硅藻土,再加入銀杏葉提取物,于78-85℃加熱回流0.5-1.5小時,過濾,濃縮;加入硅藻土的量為銀杏葉提取物重量的0.8-1.2倍,乙酸乙酯與銀杏葉提取物的液固比為15-20ml/g;

(2)再加入蒸餾水除雜,分出乙酸乙酯層,乙酸乙酯層過酸性氧化鋁柱,用水飽和乙酸乙酯洗脫,收集洗脫液;

(3)洗脫液減壓濃縮至無乙酸乙酯味,加適量乙醇使之溶解,再加水至使含醇量為60~70%,靜置,使析出粗結晶,過濾,取粗結晶,烘干;

(4)粗結晶依次用乙醇和乙酸乙酯重結晶,得成品銀杏內酯B提取物。

本發明采用乙酸乙酯從銀杏葉提取物中提取銀杏內酯B,將銀杏葉提取物加至乙酸乙酯中,會形成大量粘度大的物質,不利用后續工藝及清場的工藝,因此加入硅藻土有助于銀杏葉提取物在乙酸乙酯中的分散;當進行大量提取時,直接將硅藻土與銀杏葉提取物進行混合,不利于銀杏葉提取物的分散與混勻,因此在提取罐中加入乙酸乙酯后,在攪拌條件下先加入硅藻土,再加入銀杏葉提取物,銀杏葉提取物能較快地在乙酸乙酯中分散均勻,有利于銀杏內酯B在乙酸乙酯中的溶出,提高粗品中銀杏內酯B的含量。

上述制備方法的步驟(1)中,所述的銀杏葉提取物為從銀杏葉中提取獲得,提取方法可參考現有技術中的任何一種方法,本領域技術人員不需要付出創造性的勞動。

步驟(1)獲得的濃縮液有析出物,析出物影響柱層析,因此步驟(2)中在進行柱層析之前先于濃縮液中加水萃取,可使析出物溶于水,分去水層,有利于去除濃縮液中的大量雜質,以及在去掉析出物的同時降低濃縮液的粘度,更有利于后續的柱層析工藝。

從銀杏葉中提取制備銀杏內酯B,制備方法不同,得到的銀杏內酯B的純度以及其中雜質的種類和含量差異巨大,本發明通過大量的實驗,對銀杏內酯B的提取制備方法不斷進行改進和優化,特別包括對溶劑與色譜柱的選用、以及對整個提取路線的設計,最終得到了一個制備高純度的銀杏內酯B的制備方法,且得到的銀杏內酯B提取物中雜質的種類少,含量低,經HPLC-ELSD測定,銀杏內酯B的含量達到99%以上,銀杏內酯A的含量小于0.4%,可以作為注射制劑的原料藥,極大地提高了患者的用藥安全。另外,該方法簡單易操作、制備周期短,極大地降低了從銀杏葉中制備銀杏內酯B的成本,進一步降低了銀杏內酯B注射液的成本。

上述制備方法的步驟(4)中,粗結晶依次用乙醇重結晶3次以上、乙酸乙酯重結晶1次以上,得到的成品中銀杏內酯B的含量大于99.6%,銀杏內酯A的含量低于0.3%。

所述步驟(1)中,優選的,加入硅藻土的量為銀杏葉提取物重量的0.9-1.1倍;乙酸乙酯與銀杏葉提取物的液固比為16-18ml/g。硅藻土、銀杏葉與乙酸乙酯的用量在該范圍內,有利于提高銀杏內酯B提取物的收率以及提高粗品中銀杏內酯B的含量。

所述步驟(1)中,優選的,濾液濃縮至液固比為3-5ml/g。

所述步驟(2)中,優選的,酸性氧化鋁柱的徑高比為1:4~1:10,氧化鋁為200~300目,上樣量與氧化鋁的重量比為1:7~10,洗脫速度為1/4~1/2BV/h;更優選的,所述酸性氧化鋁柱的徑高比為1:4~1:7,上樣量與氧化鋁的重量比為1:8。

通過上述優選的技術方案,本發明獲得銀杏內酯B提取物中不含白果內酯,總銀杏酸的含量小于0.12ppm。

本發明還提供了一種前面所述的銀杏內酯B組合物的制備方法,包括以下步驟:(1)稱取處方量的聚乙二醇-400、等質量的乙醇,攪拌均勻,加入處方量的銀杏內酯B提取物,加熱至50~60℃,攪拌溶解,加入處方量的甘油,用含9-11%鹽酸的乙醇溶液調pH值至3.8~4.8,加乙醇至處方量的全量;

(2)加入配液量0.1-0.3%g/ml的活性炭,攪拌25-35分鐘,粗濾脫炭;

(3)過0.22μm濾膜,得精濾液;

(4)灌封;

(5)118-125℃熱壓滅菌13-18分鐘,檢驗,包裝,入庫。

在處方摸索過程中,發現pH值對注射液的穩定性有顯著性影響,當pH值在3.8~4.8之間時,注射液比較穩定。

與現有技術相比,本發明的有益效果為:

本發明提供的銀杏內酯B組合物中,其組分銀杏內酯B提取物的純度非常高,該銀杏內酯B提取物中銀杏內酯A的含量非常低,另外,雜質的種類少、含量低,滿足了注射劑對原料藥的要求,提高了原料藥的生物利用度以及患者的用藥安全。其中銀杏內酯B提取物的制備方法簡單易操作,特別是硅藻土的采用,有利于后續的柱層析工藝的進行,提高了制備的效率,降低了制備的成本。

具體實施方式

銀杏內酯及白果內酯的色譜測定方法采用HPLC-ELSD色譜方法:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇/四氫呋喃(2:1):水=32:68為流動相,蒸發光散射檢測器檢測(參考條件:Alltech3300:漂移管溫度60℃,空氣流速1.5L/min,增益為8;Agilent380-LC:霧化溫度30℃,漂移管溫度50℃,載氣流量1.5SLM,PMT增益為8)。積分方法:面積外標法。

總銀杏酸的含量測定參考《中國藥典》2010年版一部銀杏葉提取物項下總銀杏酸限度測定方法:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,以甲醇-四氫呋喃-水(22:10:68)為流動相;用蒸發光散射檢測器檢測(參考條件:Alltech3300:漂移管溫度60℃,空氣流速1.5L/min,增益為8;Agilent380-LC:霧化溫度30℃,漂移管溫度50℃,載氣流量1.5SLM,PMT增益為8)。積分方法:面積外標法。

比旋度的測定方法參考《中國藥典》2010年版附錄VI?E,參考條件:WZZ-3自動旋光儀溶劑:甲醇溶液,濃度:10mg/ml,溫度:20℃。

實施例1

銀杏內酯B提取物的制備:

在攪拌條件下向750ml乙酸乙酯中先加入硅藻土40g,再加入銀杏葉提取物50g,于85℃加熱回流0.5小時,過濾,濃縮,濾液濃縮至液固比為5ml:1g;;往濃縮液中加入約1/10體積的蒸餾水除雜,分出乙酸乙酯層,乙酸乙酯層過酸性氧化鋁柱,酸性氧化鋁柱的徑高比為1:4,氧化鋁為200目,上樣量與氧化鋁的重量比為1:7,用水飽和乙酸乙酯洗脫,洗脫速度為1/4BV/h,收集洗脫液;洗脫液減壓濃縮至無乙酸乙酯味,加適量乙醇使之溶解,再加水至使含醇量為60%,靜置,使析出粗結晶,過濾,取粗結晶,烘干;粗結晶依次用乙醇和乙酸乙酯重結晶,得成品銀杏內酯B提取物。樣品檢測銀杏內酯B含量為99.0%,銀杏內酯A的含量小于0.4%。成品的比旋度為-61°。

實施例2

銀杏內酯B提取物的制備:

在攪拌條件下向1000ml乙酸乙酯中先加入硅藻土40g,再加入銀杏葉提取物50g,于79℃加熱回流1.5小時,過濾,濃縮,濾液濃縮至液固比為4ml:1g;往濃縮液中加入約1/9體積的蒸餾水除雜,分出乙酸乙酯層,乙酸乙酯層過酸性氧化鋁柱,酸性氧化鋁柱的徑高比為1:4,氧化鋁為200目,上樣量與氧化鋁的重量比為1:7,用水飽和乙酸乙酯洗脫,洗脫速度為1/4BV/h,收集洗脫液;洗脫液減壓濃縮至無乙酸乙酯味,加適量乙醇使之溶解,再加水至使含醇量為60%,靜置,使析出粗結晶,過濾,取粗結晶,烘干;粗結晶依次用乙醇重結晶3次和乙酸乙酯重結晶1次,得成品銀杏內酯B提取物。樣品檢測銀杏內酯B含量為99.6%,銀杏內酯A的含量小于0.3%。成品的比旋度為-59.3°。

實施例3

銀杏內酯B提取物的制備:

在攪拌條件下向850ml乙酸乙酯中先加入硅藻土60g,再加入銀杏葉提取物50g,于80℃加熱回流1小時,過濾,濃縮,濾液濃縮至液固比為3ml:1g;往濃縮液中加入約1/11體積的蒸餾水除雜,分出乙酸乙酯層,乙酸乙酯層過酸性氧化鋁柱,酸性氧化鋁柱的徑高比為1:10,氧化鋁為300目,上樣量與氧化鋁的重量比為1:10,用水飽和乙酸乙酯洗脫,洗脫速度為1/2BV/h,收集洗脫液;洗脫液減壓濃縮至無乙酸乙酯味,加適量乙醇使之溶解,再加水至使含醇量為70%,靜置,使析出粗結晶,過濾,取粗結晶,烘干;粗結晶依次用乙醇重結晶3次和乙酸乙酯重結晶1次,得成品銀杏內酯B提取物。樣品檢測銀杏內酯B含量為99.7%,白果內酯未檢出,銀杏內酯A的含量為0.3%,總銀杏酸的含量為0.12ppm。成品的比旋度為-57.8°。

實施例4

銀杏內酯B提取物的制備:

在攪拌條件下向900ml乙酸乙酯中先加入硅藻土45g,再加入銀杏葉提取物50g,于79℃加熱回流1小時,過濾,濃縮,濾液濃縮至液固比為3.5ml:1g;往濃縮液中加入約1/10體積的蒸餾水除雜,分出乙酸乙酯層,乙酸乙酯層過酸性氧化鋁柱,酸性氧化鋁柱的徑高比為1:7,氧化鋁為300目,上樣量與氧化鋁的重量比為1:8,用水飽和乙酸乙酯洗脫,洗脫速度為1/2BV/h,收集洗脫液;洗脫液減壓濃縮至無乙酸乙酯味,加適量乙醇使之溶解,再加水至使含醇量為70%,靜置,使析出粗結晶,過濾,取粗結晶,烘干;粗結晶依次用乙醇重結晶3次和乙酸乙酯重結晶1次,得成品銀杏內酯B提取物。樣品檢測銀杏內酯B含量為99.6%,白果內酯未檢出,銀杏內酯A的含量為0.2%,總銀杏酸的含量為0.12ppm。成品的比旋度為-58.4°。

實施例5

銀杏內酯B提取物的制備:

在攪拌條件下向900ml乙酸乙酯中先加入硅藻土55g,再加入銀杏葉提取物50g,于78℃加熱回流1小時,過濾,濃縮,濾液濃縮至液固比為3.5ml:1g;往濃縮液中加入約1/10體積的蒸餾水除雜,分出乙酸乙酯層,乙酸乙酯層過酸性氧化鋁柱,酸性氧化鋁柱的徑高比為1:4,氧化鋁為300目,上樣量與氧化鋁的重量比為1:8,用水飽和乙酸乙酯洗脫,洗脫速度為1/2BV/h,收集洗脫液;洗脫液減壓濃縮至無乙酸乙酯味,加適量乙醇使之溶解,再加水至使含醇量為65%,靜置,使析出粗結晶,過濾,取粗結晶,烘干;粗結晶依次用乙醇重結晶3次和乙酸乙酯重結晶1次,得成品銀杏內酯B提取物。樣品檢測銀杏內酯B含量為99.7%,白果內酯未檢出,銀杏內酯A的含量為0.2%,總銀杏酸的含量為0.10ppm。成品的比旋度為-57°~-61°。成品的比旋度為-57°。

實施例6

銀杏內酯B注射液的制備:

稱取聚乙二醇-400580g、等質量的乙醇,攪拌均勻,加入實施例1制備的銀杏內酯B20g,加熱至50℃,攪拌溶解,加入甘油770g,用含9%鹽酸的乙醇溶液調pH值至4.6,加乙醇60g,攪拌均勻;再加入配液量0.1%(g/ml)的活性炭,攪拌25分鐘,粗濾脫炭;過0.22μm濾膜,得精濾液;灌封,每瓶裝量2mL;118℃熱壓滅菌18分鐘,檢驗,包裝,入庫。

實施例7

銀杏內酯B注射液的制備:

稱取聚乙二醇-400630g、等質量的乙醇,攪拌均勻,加入實施例2制備的銀杏內酯B20g,加熱至55℃,攪拌溶解,加入甘油830g,用含11%鹽酸的乙醇溶液調pH值至4.2,加乙醇70g,攪拌均勻;再加入配液量0.3%(g/ml)的活性炭,攪拌35分鐘,粗濾脫炭;過0.22μm濾膜,得精濾液;灌封,每瓶裝量2mL;125℃熱壓滅菌13分鐘,檢驗,包裝,入庫。

實施例8

銀杏內酯B注射液的制備:

稱取聚乙二醇-400590g、等質量的乙醇,攪拌均勻,加入實施例3制備的銀杏內酯B20g,加熱至60℃,攪拌溶解,加入甘油790g,用含10%鹽酸的乙醇溶液調pH值至4.0,加乙醇60g,攪拌均勻;再加入配液量0.1%(g/ml)的活性炭,攪拌30分鐘,粗濾脫炭;過0.22μm濾膜,得精濾液;灌封,每瓶裝量2mL;121℃熱壓滅菌15分鐘,檢驗,包裝,入庫。

實施例9

銀杏內酯B注射液的制備:

稱取聚乙二醇-400610g、等質量的乙醇,攪拌均勻,加入實施例4制備的銀杏內酯B20g,加熱至50℃,攪拌溶解,加入甘油810g,用含10%鹽酸的乙醇溶液調pH值至3.8,加乙醇60g,攪拌均勻;再加入配液量0.1%(g/ml)的活性炭,攪拌30分鐘,粗濾脫炭;過0.22μm濾膜,得精濾液;灌封,每瓶裝量2mL;121℃熱壓滅菌15分鐘,檢驗,包裝,入庫。

實施例10

銀杏內酯B注射液的制備:

稱取聚乙二醇-400600g、等質量的乙醇,攪拌均勻,加入實施例5制備的銀杏內酯B20g,加熱至60℃,攪拌溶解,加入甘油800g,用含10%鹽酸的乙醇溶液調pH值至4.8,加乙醇60g,攪拌均勻;再加入配液量0.1%(g/ml)的活性炭,攪拌30分鐘,粗濾脫炭;過0.22μm濾膜,得精濾液;灌封,每瓶裝量2mL;121℃熱壓滅菌15分鐘,檢驗,包裝,入庫。

實驗例1

本實驗例參照以下對比文件的方法制備了銀杏內酯B,并采用本發明中的測試方法,測定了銀杏內酯B提取物中銀杏內酯B、白果內酯、銀杏內酯A、總銀杏酸的含量,結果見表1。

樣品1為參照專利申請CN101182325A的實施例1的方法制備的銀杏內酯B提取物;

樣品2為參照專利申請CN101412725A的實施例1的方法制備的銀杏內酯B提取物;

樣品3為參照專利申請CN1680392A的實施例1的方法制備的銀杏內酯B提取物;

樣品4為參照專利申請CN101302222A的實施例1的方法制備的銀杏內酯B提取物;

樣品5為參照專利申請CN102627656A的實施例1的方法制備的銀杏內酯B提取物;

表1

? 銀杏內酯B 白果內酯 銀杏內酯A 總銀杏酸 樣品1 97.8% 未檢出 1.1% 2ppm 樣品2 98.3% 0.5% 0.5% 8ppm 樣品3 98.7% 0.3% 0.3% 10ppm 樣品4 91.5% 1.7% 2.5% 15ppm 樣品5 98.6% 0.5% 0.3% 7ppm

表1的測定結果表明,與上述專利申請的現有技術相比,本發明制備的銀杏內酯B提取物中,銀杏內酯B含量高、銀杏內酯A的含量低,雜質的含量少,特別是白果內酯、總銀杏酸的含量非常低,可作為注射劑的原料藥,極大地提高了患者的用藥安全。

實驗例2

本實驗例測試了本發明制備的銀杏內酯B提取物的穩定性。

樣品1為實施例1產品,樣品2為實施例2產品;樣品3為實施例5產品;

樣品4為采用專利CN101182325A實施例1的方法得到的HPLC純度為97.8%的銀杏內酯B;

樣品5為采用專利CN1680392A實施例1的方法得到的HPLC純度為99.0%的銀杏內酯B;

樣品各取1g,本實驗按照中國藥典2005版第二部附錄XIX?C藥物穩定性試驗指導原則進行,結果如下:

表2、加速試驗結果

表3、長期試驗結果

銀杏內酯B提取物中,銀杏內酯A、白果內酯以及總銀杏酸對銀杏內酯B的穩定性都有一定的影響,本發明提供的杏內酯B提取物中銀杏內酯A以及雜質的種類和含量較少,銀杏內酯B的含量較高,這些物質對銀杏內酯B的穩定性影響較小,通過加速試驗及長期穩定試驗考察,結果表明本發明的銀杏內酯B提取物相對于現有技術具有更好的穩定性,加速、長期試驗純度含量變化小。

實驗例3

注射液的pH與穩定性的關系考察

樣品1為按照實施例6的方法制備的銀杏內酯B注射液,區別在于,其pH為3.0;

樣品2為按照實施例6的方法制備的銀杏內酯B注射液,區別在于,其pH為3.8;

樣品3為按照實施例7的方法制備的銀杏內酯B注射液,區別在于,其pH為4.8;

樣品4為按照實施例7的方法制備的銀杏內酯B注射液,區別在于,其pH為4.0;

本實驗按照中國藥典2005版第二部附錄XIX?C藥物穩定性試驗指導原則進行,結果如下:

表2、加速試驗結果

表3、長期試驗結果

本實驗例的結果表明,當pH在3.8-4.8之間時,本發明提供的銀杏內酯B注射液比較穩定。另外,從樣品2、3的加速試驗和長期試驗可知,本發明提供的銀杏內酯B注射液具有非常好的穩定性。

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本文標題:一種銀杏內酯B組合物及其制備方法.pdf
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