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石榴酸或石榴酸化合物在提高體內DHA含量上的應用.pdf

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石榴 酸化 提高 體內 DHA 含量 應用
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摘要
申請專利號:

CN201310137298.6

申請日:

20130419

公開號:

CN103211226B

公開日:

20150826

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A23L1/30,A23K1/16,A23C9/152,A23C9/13 主分類號: A23L1/30,A23K1/16,A23C9/152,A23C9/13
申請人: 浙江大學
發明人: 李鐸,楊靜,袁高峰
地址: 310058 浙江省杭州市西湖區余杭塘路866號
優先權: CN201310137298A
專利代理機構: 杭州中成專利事務所有限公司 代理人: 金祺
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201310137298.6

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明屬于食品營養學、臨床營養學領域,主要是應用石榴酸或石榴酸化合物來提高哺乳動物和人類體內的二十二碳六烯酸(DHA)的含量;石榴酸化合物包括石榴酸酯、石榴酸鹽或石榴酸代謝物;石榴酸包括含有石榴酸的石榴籽油或者含有石榴酸的栝樓籽油。本發明的石榴酸或石榴酸化合物的服用方法為口服。

權利要求書

1.石榴酸或石榴酸化合物在制備提高體內DHA含量的食品上的應用,其特征是:用于提高人體體內的DHA含量;所述石榴酸化合物為石榴酸酯、石榴酸鹽或石榴酸代謝物;所述石榴酸為含有石榴酸的石榴籽油或者含有石榴酸的栝樓籽油;使用方法為:將石榴酸或石榴酸化合物與活性物質混合后進行使用;所述活性成分為維生素、脂肪酸、酚酸類或黃酮類;所述脂肪酸為n-3多不飽和脂肪酸、共軛亞油酸、共軛三烯酸異構體或共軛三烯酸復合體;所述酚酸類為茶多酚或兒茶素;所述黃酮類為蘆丁或竹葉黃酮。2.根據權利要求1所述的石榴酸或石榴酸化合物在制備提高體內DHA含量的食品上的應用,其特征是:n-3多不飽和脂肪酸為亞麻酸、DHA和EPA。

說明書

技術領域

本發明屬于食品營養學、臨床營養學領域,主要是應用石榴酸或石榴酸化合物來提高哺乳動物和人類體內的二十二碳六烯酸(DHA)的含量。

背景技術

DHA(Docosahexaenoic?acid,?C22:6n-3),二十二碳六烯酸,俗稱腦黃金,是一種對人體非常重要的多不飽和脂肪酸,屬于Omega-3不飽和脂肪酸家族中的重要成員。DHA是神經系統細胞生長及維持的一種主要元素,是大腦和視網膜的重要構成成分,在人體大腦皮層中含量高達20%,在眼睛視網膜中所占比例最大,約占50%,因此,對胎嬰兒智力和視力發育至關重要。研究表明,足量DHA的攝入,可以減少產后抑郁;DHA以及其衍生物可以殺死多種癌細胞;DHA可以抑制發炎前驅物質的形成,具有消炎作用;可以降低血脂肪、預防心腦血管疾病。國外有研究顯示,DHA攝入適宜,可降低患阿爾茨海默氏老年癡呆癥的風險,并且能夠減緩與年齡增長相關的認知能力的衰退。不僅對老年人,DHA對健康年輕人保持全身和脊椎的骨密度峰值也有積極作用。

目前,市場上的DHA補充劑主要有三類,一類是魚類DHA制品,第二類是藻類DHA制品,第三類是蛋黃DHA。但是攝入之后對體內的DHA含量的上升有限,因此利用營養物質提高哺乳動物體內DHA的新方法需要研究。

共軛亞麻酸(Conjugated?linolenic?acid)是一種十八碳共軛三烯脂肪酸,具有非常有益的生理活性,主要包括:抗癌、抗致癌、降血脂、減肥等。其中,共軛亞麻酸可以改變脂代謝等一系列功能,以及其在體內轉化為共軛亞油酸(conjugated?linoleic?acid,?9c,11t-CLA),從而發揮更多的生理功能。共軛亞麻酸可以按雙鍵的位置不同(8,10,12-18:3和9,11,13-18:3)和雙鍵的幾何構型不同(c,c,c-,c,t,c-,c,t,t-等)而存在不同的異構體,其中,石榴酸(punicic?acid,?石榴酸),也稱栝樓酸,即9c,11t,13c-18:3是主要的一種共軛亞麻酸異構體,其結構式如下:

石榴酸主要存在于石榴(Punica?granatum)和栝樓(Trichosanthes?kirilowii)的種子中,據報道,石榴籽油中含有60~80%的石榴酸,不同品種的含量有差別。因此石榴酸是一種無毒、天然、且口服有效的食品成分。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種石榴酸或石榴酸化合物在提高體內DHA含量上的應用法,采用本發明的方法能提高哺乳動物和人類體內DHA的含量。

為了解決上述技術問題,本發明提供一種石榴酸或石榴酸化合物在提高體內DHA含量上的應用。

作為本發明的石榴酸或石榴酸化合物在提高體內DHA含量上的應用的改進:用于提高動物或人體體內的DHA含量。

作為本發明的石榴酸或石榴酸化合物在提高體內DHA含量上的應用的進一步改進:石榴酸化合物為石榴酸酯、石榴酸鹽或石榴酸代謝物。

作為本發明的石榴酸或石榴酸化合物在提高體內DHA含量上的應用的進一步改進:石榴酸為含有石榴酸的石榴籽油或者含有石榴酸的栝樓籽油。

作為本發明的石榴酸或石榴酸化合物在提高體內DHA含量上的應用的進一步改進:

將石榴酸或石榴酸化合物與活性物質混合后進行使用;

所述活性成分為維生素、脂肪酸、酚酸類、黃酮類或抗氧化物質。

作為本發明的石榴酸或石榴酸化合物在提高體內DHA含量上的應用的進一步改進:

脂肪酸為n-3多不飽和脂肪酸、共軛亞油酸、共軛三烯酸異構體或共軛三烯酸復合體;

酚酸類為茶多酚或兒茶素;

黃酮類為蘆丁或竹葉黃酮。

n-3多不飽和脂肪酸為亞麻酸、DHA和EPA。

本發明中,石榴酸或石榴酸化合物可作為營養補充劑,以提高哺乳動物及人體內的DHA的含量。

本發明中,石榴酸或石榴酸化合物可以來源于石榴籽油、栝樓籽油等富含石榴酸的油脂,也可以來源于化學合成。

本發明中,石榴酸或石榴酸化合物采用口服的形式;可單獨服用,也可以在飼料或食品中,以油脂載體化合物等形式。該食品包括功能食品、動物飼料、牛奶、乳類、谷物食品、嬰兒食品、老年食品等。本發明中,石榴酸化合物與a-生育酚同時存在。本發明中,石榴酸或石榴酸化合物的應用形式可以是通過乳劑、軟凝膠、沖劑、乳品、微乳液、以及食用油。

本發明屬于一種提高動物或人體體內DHA含量的方法,這種方法包括給動物或人服用石榴酸或石榴酸化合物,以單劑量或多劑量喂給動物或人,喂食的載體可以多樣化。可以營養補充產品的形式使用石榴酸或石榴酸化合物。營養補充產品包括谷物食品、牛奶、酸奶等乳制品、嬰兒食品、老年配方食品、體重控制產品、運動營養配方食品、飲料等、低碳水化合物食品、糖尿病人專用食品以及相關保健產品。可將石榴酸或石榴酸化合物制成動物食品包括寵物飼料(貓糧、狗糧、其他寵物飼料等)。

本發明的服用方法為口服;用量為石榴酸0.15~3g/d,或者是石榴籽油0.25~5?mL(石榴酸含量為60%)或石榴籽油0.1875~3.75?mL?(石榴酸含量為80%)。

備注說明:石榴酸含量為60%是指1000mL石榴籽油中含有600g石榴酸。其余類同。

本發明可接受的載體包括膠囊、軟膠囊、片劑、乳劑等,以軟膠囊或硬膠囊形式的補充食品,其膠囊填充物可以包括a-生育酚、可食用明膠、凝膠、淀粉、糊精、淀粉衍生物。

本發明具有如下優點:

1.簡單的通過服用石榴酸或石榴籽油或其他富含石榴酸的油脂,即可提高體內的DHA的含量,可以起到抗氧化,提高認知等的作用。

2.石榴籽油安全無毒,富含石榴酸(60~80%),是一種很好的補充DHA的新資源。完全可以采取冷榨的方式獲取(常規方式),排除了有機溶劑提取的不安全因素。

3.石榴籽油是采取石榴下腳料石榴籽進行壓榨得到的,可以是一種變廢為寶的好方法。

4.目前中老年人補充DHA大多通過攝取魚油或深海魚油,但是中老年的肝臟的吸收以及排毒功能較差,不能很好的吸收及利用DHA,而石榴酸攝入量少,且在體內的轉化率高達90%以上(多篇文獻報道)。

5.在正常飲食外額外攝入石榴酸或石榴籽油,對肝臟和脂肪組織并沒有造成不良影響。沒有脂滴產生。

附圖說明

下面結合附圖對本發明的具體實施方式作進一步詳細說明。

圖1為肝臟和脂肪的切片對比圖。

具體實施方式

實驗1、

采用六周齡的雄性ICR小鼠,適應7?d后,采用以飼料(常規飼料)中添加含1%的石榴酸的飼料喂養的作為實驗組(n?=?8),即,在每kg飼料中加入含有10g石榴酸的石榴籽油(石榴酸含量為80%)。其中對照組飲食中,以與石榴籽油等體積的玉米油代替石榴籽油。自由采食,飼養6周后,處死,取肝臟、腎臟、心臟和脾臟等備用(用來測定體內DHA含量的水平)。

對ICR小鼠內臟等樣品進行總脂肪提取后,對總脂肪進行甲酯化,采用GC分析ICR小鼠內臟的脂肪酸組成情況,以及石榴酸在體內的代謝情況。

具體實驗步驟如下:

1)總脂肪的提取

a.萃取:根據Floch等人(1957)的方法以氯仿:甲醇=2:1萃取。即取0.5g內臟,置于20?mL試管中,加入10?mL含50?mg/L?2,6-二叔丁基對甲酚(BHT)的氯仿甲醇溶液,充分混勻震蕩,4℃下浸提24h。

b.過濾:過濾將提取好的樣品,過濾至100?ml分液漏斗中。原萃取試管再用5?ml?氯仿:甲醇?=?2:1清洗,轉入分液漏斗;再用5?ml氯仿清洗,轉入分液漏斗。除去濾紙,再加入4?ml生理鹽水,并放入分液漏斗中。輕搖分液漏斗,并打開塞子放氣,重復,直到里外氣壓平衡。然后劇烈震蕩分液漏斗。分液漏斗靜置約4小時,兩個液面完全分開。然后收集下層(氯仿層)至圓底蒸發瓶中。

c.濃縮:用圓底蒸發瓶接取分液漏斗的下層有機相,于30℃水浴中抽真空旋轉蒸發,用2?ml氯仿洗滌三次至數滴清亮透明油狀提取物,最后將瓶內酯類轉移至甲酯化管。N2吹干具塞試管中的有機試劑。如不能及時測定,可以充氮后保存在-20℃環境中待測,二周內測完。

2)甲酯化:

a、甲酯化:加入1?mL甲苯和3?mL硫酸甲醇溶液,擰緊蓋子,在70?℃水浴條件下,甲酯化2個小時,每隔30?min進行震蕩搖勻,加速甲酯化。

b、甲酯物的提取:甲酯化完后,加入2?ml正己烷,再加入生理鹽水至瓶口處,擰緊蓋子,劇烈震蕩1?min,2000?rpm離心10?min。將上層正己烷相用玻璃吸管小心吸出至一事先放有2?ml蒸餾水的尖頭離心管中,振蕩。再將上層轉移至事先裝有少量Na2SO4的尖頭離心管中。將上層移入后,輕輕振蕩,若發現其中的Na2SO4可以跳動,證明沒有水分吸過來。再將上層石油醚相轉移至一具塞試管中。

c、甲酯物的純化:用正己烷快速過SPE固相萃取小柱,再將樣品快速過柱。用正己烷清洗具塞試管兩次,都快速過柱。用5?%乙醚緩慢清洗聚酰胺柱,液體成滴收集到具塞試管。先用氯仿:甲醇為2:1的溶液2?ml,再用2ml正己烷慢速清洗柱子。在38?℃水浴下N2吹干。

3)氣相(GC)色譜分析

用100μL正己烷重新融解樣品至樣品瓶中,進樣2μL由島津氣相色譜儀(GC-2010型)測定樣品的脂肪酸成分。氣相色譜的分析條件為:調節空氣到50,調節氫氣到75。調節Col(柱溫)到160?℃,調節Det(監測器溫度)到260℃,調節Aux(進樣口溫度)到270?℃。柱溫升溫程序:160℃?(0?min);20℃?/min、180?℃?(10?min);20?℃?/min、220℃?(5?min);20?℃?/min、230?℃?(16.5?min)。

脂肪酸的成分分析方法為:采用GC-2014型氣相色譜儀測定脂肪酸,用杭州英譜科技開發有限公司HS色譜數據工作站V4.0采集譜圖,并處理分析所采集的譜圖數據。色譜峰采用混合的脂肪酸甲酯標樣(Nu-Chek-Prep?Inc,?USA)來進行鑒定。定量方式采用面積法,定量方法為歸一法。

統計分析方法采用SPSS16.0進行分析。概論值差異(p<0.05)認為統計學上有差異。

結果如下表1

表1

*表示有顯著性差異(p<0.05)

根據表1所得的數據,我們能得出以下結論:攝入1%的石榴酸,可以顯著提高肝臟、腎臟、心臟和脾臟中的DHA的含量。

實驗2

采用4周齡的SD大鼠,適應2周后,隨機分為3組,每組10只。接下來4周,3組大鼠每天分別灌以含石榴酸的橄欖油(石榴酸的質量濃度為10%)、橄欖油以及水(作為對照組),灌胃劑量為0.5?mL/100g。SD大鼠采用聚碳酸酯塑料籠飼養,飼養環境保持恒溫(22±1oC),12-h光照和黑暗交替,所有的動物自由飲食。實驗結束后(即,灌胃4周后),處死SD大鼠,迅速解離腹壁后脂肪、肝臟,用生理鹽水沖洗,待測。

腹壁后脂肪、肝臟切片用10%緩沖的中性福爾馬林固定,然后石蠟包埋,然后切成6?μm薄片,染色后,進行組織學觀察。與對照組相比,橄欖油組和石榴酸組并無顯著異常;如圖1所示。

對SD大鼠內臟等樣品進行總脂肪提取后,對總脂肪進行甲酯化,采用GC分析SD大鼠內臟的脂肪酸組成情況,以及石榴酸在體內的代謝情況。統計分析方法采用SPSS16.0進行分析。概論值差異(p<0.05)認為統計學上有差異。具體如表2所示。

表2

肝臟脂肪酸(%) 對照組 橄欖油組 石榴酸組 DHA 9.44±0.49 9.01±0.85 13.00±1.58?*

*表示有顯著性差異(p<0.05)

最后,還需要注意的是,以上列舉的僅是本發明的若干個具體實施例。顯然,本發明不限于以上實施例,還可以有許多變形。本領域的普通技術人員能從本發明公開的內容直接導出或聯想到的所有變形,均應認為是本發明的保護范圍。

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