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蒽環類抗生素及其可藥用鹽在治療新生血管性青光眼中的用途.pdf

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蒽環類 抗生素 及其 藥用 治療 新生 血管性 青光眼 中的 用途
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摘要
申請專利號:

CN201110431274.2

申請日:

20111221

公開號:

CN103169718A

公開日:

20130626

當前法律狀態:

有效性:

有效

法律詳情:
IPC分類號: A61K31/704,A61K31/7048,A61K31/706,A61K31/7056,A61K31/7042,A61K31/136,A61P27/06 主分類號: A61K31/704,A61K31/7048,A61K31/706,A61K31/7056,A61K31/7042,A61K31/136,A61P27/06
申請人: 張雅珍
發明人: 張雅珍,李鐵力,白毅
地址: 100034 北京市西城區劉蘭塑胡同28號
優先權: CN201110431274A
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201110431274.2

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法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種蒽環類抗生素及其可藥用鹽在治療新生血管性青光眼中的用途。本發明發現蒽環類抗生素及其可藥用鹽在治療新生血管性青光眼方面有很好的效果,尤其是將蒽環類抗生素制備成納米制劑、微球制劑、脂質體以及水凝膠等長效制劑,降低了蒽環類抗生素的毒性,使其可以眼內給藥,同時擴大了給藥劑量,持續藥效時間長久,藥物療效強于蒽環類抗生素的普通制劑,進行眼內給藥后,對新生血管性青光眼有非常好的治療效果,填補了目前尚未有較好地針對新生血管性青光眼的治療藥物的空白。

權利要求書

1.蒽環類抗生素及其可藥用鹽在制備治療新生血管性青光眼藥物中的用途。2.根據權利要求1所述的用途,其特征在于,所述蒽環類抗生素為如下結構的化合物及其立體異構體:其中,R1為H、OH、CH、CHOH、或OCH,R2為COR1或CR1R1,R3為H、OH、CH、CHOH、OCH、吡啶基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、或吡喃基。3.根據權利要求1所述的用途,其特征在于,所述蒽環類抗生素為多柔比星、表多柔比星、吡喃多柔比星、米托蒽醌、柔紅霉素、伊達比星、阿柔比星、或洋紅霉素。4.根據權利要求1-3任一所述的用途,其特征在于,所述藥物由所述蒽環類抗生素及其可藥用鹽與藥學上可接受的輔料制備。5.根據權利要求4所述的用途,其特征在于,所述藥物為普通粉針劑或長效緩釋注射劑,其中,所述長效緩釋注射劑為納米粒制劑、微球制劑、水凝膠制劑或脂質體制劑。6.根據權利要求5所述的用途,其特征在于,所述納米粒制劑、微球制劑、水凝膠制劑制備時采用的輔料包括高分子材料,所述高分子材料選自:聚酸酐、聚氧化烯、聚酰胺、聚酯、聚丙烯酸樹脂、聚醚、聚磷腈、淀粉、膠原、多肽或聚糖中的一種或多種,或選自所述高分子材料的不同單體之間的共聚物;所述脂質體制劑制備時采用的輔料包括天然或合成的磷脂、類脂或其組合。7.根據權利要求6所述的用途,其特征在于,所述的高分子材料選自:聚酸酐、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚酸酐-聚乙二醇共聚物、N-異丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物、聚氰基丙烯酸酯、聚乳酸、十八烷二酸酐-乙二醇嵌段共聚物、聚乳酸羥基乙酸共聚物、聚乳酸羥基乙酸-聚乙二醇共聚物、聚乙交酯、乙交酯丙交酯-乙二醇-乙交酯丙交酯三嵌段共聚物、聚醚砜、明膠、聚羥基丁酯、泊洛沙姆、膠原、纖維蛋白原、白蛋白、纖維素、葡聚糖、海藻酸鹽、右旋糖酐、透明質酸、多肽或殼聚糖中的一種或多種。8.根據權利要求1所述的用途,其特征在于,所述蒽環類抗生素對于人體的眼內給藥劑量是0.5-2000μg/kg。9.根據權利要求8所述的用途,其特征在于,所述蒽環類抗生素對于人體的眼內給藥劑量是1-1500μg/kg。10.根據權利要求8所述的用途,其特征在于,所述蒽環類抗生素對于人體的眼內給藥劑量是3-1000μg/kg。

說明書

技術領域

本發明涉及一種治療新生血管性青光眼的藥物,具體涉及一系列傳統抗腫瘤抗生素蒽環類抗生素及其可藥用鹽在制備治療新生血管性青光眼藥物中的新用途,特別地,所述蒽環類抗生素及其可藥用鹽制備成為納米制劑、微球制劑、脂質體以及水凝膠等長效制劑。

背景技術

新生血管性青光眼是一種繼發性的青光眼疾病,主要表現在患者眼中虹膜上新生大量血管,表現青光眼的癥狀。導致新生血管性青光眼的病因很多,但是最主要引起新生血管性青光眼的是視網膜靜脈阻塞和糖尿病性視網膜病變,這兩種眼病均可繼發出新生血管性青光眼,這兩種眼病引起的新生血管性青光眼主要占新生血管性青光眼發病的75%。剩下的25%由其他各種原因引起的新生血管性青光眼,大概有多達40余種不同疾病可以廣泛累及眼后節缺氧或局部性的眼前節缺氧,導致新生血管性青光眼。

視網膜靜脈阻塞以及糖尿病視網膜病變是最主要的引起虹膜新生血管和發展成新生血管性青光眼的原因,新生血管性青光眼已成為主要致盲病因之一,發病率隨病程發展而增加。視網膜微血管病變引起視網膜組織發生變化,激發出具有活性的血管形成因子,這些因子向眼前部擴散,刺激虹膜形成纖維血管膜,跨越眼前房角,影響房水排出,致眼壓升高,此時表現為開角型青光眼。當纖維血管膜收縮,眼前房角粘連,則變成新生血管性青光眼等嚴重并發癥,引起閉角型青光眼。新生血管性青光眼房角關閉期,眼壓升高十分頑固,眼痛劇烈且難以控制,同時治療也非常復雜和困難。隨著病情的進展,眼組織和視功能往往遭到嚴重的、不可挽回的損害,患者眼部充血,角膜水腫,劇烈眼痛、頭痛,常導致失明。新生血管性青光眼治療難度大、治療效果差,晚期患者即使手術治療也難以控制眼壓,最終導致視功能喪失。

由于新生血管容易破裂,反復發生前房出血,目前臨床上采用全視網膜光凝、全視網膜冷凍、虹膜角膜角光凝等手段,由于會產生術后炎癥和疼痛比較嚴重,而且往往效果不佳,時常加重炎癥和加快房角新生血管形成的進展,而遭到諸多臨床工作者和學術界的批評。藥物的治療主要采取降眼壓的方法,而這些藥物往往治標不治本,阿托品、糖皮質激素等藥品均是暫時緩解眼部癥狀,不能徹底治療新生血管性青光眼,因此目前臨床上暫無較有效地治療手段。

目前新生血管性青光眼的病因及發病機制尚不完整,治療方面亦無確切有效的方法,現有的治療手段仍存在諸多爭議。新生血管性青光眼與視網膜靜脈阻塞、糖尿病眼等疾患關系密切。由于它的致盲性,將會嚴重降低患者的生活質量。如果能開發出一種藥物能夠有效治療新生血管性青光眼,避免病情惡化,顯現出比外科治療技術手段更好的治療效果或是徹底解決這個頑疾將產生重大的現實意義。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種蒽環類抗生素及其可藥用鹽在制備治療新生血管性青光眼藥物中的新用途,尤其是將所述蒽環類抗生素及其可藥用鹽制備成為納米制劑、微球制劑、脂質體以及水凝膠等長效制劑,能夠獲得更好的治療效果。

本發明采用的具體技術方案為:

本發明所述的蒽環類抗生素為結構如下的化合物及其立體異構體:

其中,R1為H、OH、CH3、CH2OH、或OCH3,R2為COR1或CR1R1,R3為H、OH、CH3、CH2OH、OCH3、吡啶基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、或吡喃基。

更優選地,所述蒽環類抗生素為多柔比星(又稱為阿霉素)、表多柔比星、吡喃多柔比星、米托蒽醌、柔紅霉素(又稱為道諾霉素、正定霉素)、伊達比星、阿柔比星(又稱為阿克拉霉素)、或洋紅霉素(又稱為卡柔霉素、卡米諾霉素)

上述化合物可以通過現有技術中已經公開的方法制備獲得,一些化合物可以通過商業途徑購買獲得。

本發明將蒽環類抗生素及其可藥用鹽與藥學上可接受的輔料組合制備成各種常用的制劑用于治療新生血管性青光眼的病癥,這些制劑包括:普通粉針劑、長效緩釋注射劑。優選地,所述的長效緩釋注射劑可以是納米粒制劑、微球制劑、水凝膠制劑或脂質體制劑。優選地,所述水凝膠制劑為溫敏水凝膠制劑。所述蒽環類抗生素對于人體的眼內給藥劑量是0.5-2000μg/kg,優選1-1500μg/kg,更優選3-1000μg/kg。

在制備所述的納米粒、微球、水凝膠制劑時,采用的藥學上可接受的輔料包括高分子材料,所述高分子材料選自:聚酸酐、聚氧化烯、聚酰胺、聚酯、聚丙烯酸樹脂、聚醚、或聚糖中的一種或多種,或選自所述幾種高分子材料的不同單體之間的共聚物。優選地,所述高分子材料選自聚酸酐、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚酸酐-聚乙二醇共聚物、N-異丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物、聚氰基丙烯酸酯、聚乳酸、十八烷二酸酐-乙二醇共聚物、聚乳酸羥基乙酸共聚物、聚乳酸羥基乙酸-聚乙二醇共聚物、聚乙交酯、乙交酯丙交酯-乙二醇-乙交酯丙交酯三嵌段共聚物、聚醚砜、明膠、聚羥基丁酯、泊洛沙姆、膠原蛋白、纖維蛋白原、白蛋白、纖維素、葡聚糖、海藻酸鹽、右旋糖酐、透明質酸、多肽或殼聚糖等中的一種或多種。

在制備所述的脂質體制劑時,采用的藥學上可接受的輔料包括天然或合成的磷脂、類脂或其組合。

上述藥物制劑可以通過現有技術中公開的方法制備獲得,也可以采用本發明實施例中記載的方法制備獲得。

目前,蒽環類抗生素常用于治療白血病和抗腫瘤。有較少人將其用于治療增殖性視網膜病變。本發明人對蒽環類抗生素進行了新適應癥的研究,并欣喜地發現將其以納米或是微球等長效制劑的形式眼內給藥后,蒽環類抗生素對治療新生血管性青光眼具有良好的效果,且不會產生蒽環類抗生素極易對眼部產生的多種副作用。研究同時發現蒽環類長效緩釋制劑不僅干預虹膜新生血管的生長調控,而且對新生血管性青光眼有非常好的治療作用,更具有靶向作用,其具有作用時間長、毒副作用小,能明顯提高生物利用率等優點。在這種靶向緩釋給藥的作用方式,藥物可以持續作用很久,極大地降低了蒽環類本有的較大的眼部副做用,使之發揮新的眼部治療效果,可治療新生血管性青光眼。

具體實施方式

下面具體實施例對本發明作進一步詳細說明,但本發明不僅局限以下實施例。下述實施例中所用方法如無特別說明均為常規方法,所用的試驗材料,如無特殊說明,均為常規生化試劑供應商購買得到。

制備實施例如下:

實施例1

①取300mg聚乳酸羥基乙酸共聚物(PLGA)加入到1ml二氯甲烷中制備成溶液;

②將50mg阿柔比星加入到①中制得的溶液中,超聲混勻;

③用注射器將②中的溶液緩慢注入到含有0.05%蛋黃卵靈脂的棉籽油中,1000r/min攪拌20min后,降低轉速至200r/min繼續攪拌4h;

④向步驟③中加入20ml石油醚,30min后8000r/min離心5min;

⑤收集微球,石油醚洗滌并且揮干。

實施例2

①取200mg?PLGA加入到1ml四氫呋喃溶液中制備成溶液;

②將50mg米托蒽醌加入0.2ml甘油中,混勻后加入到①制得的溶液中,勻漿器攪拌1min后得到初乳;

③將其加入到12ml的2%聚乙烯醇(PVA)溶液中,1000r/min攪拌5min后再加入120ml的0.5%PVA溶液得復乳;

④降低轉速至200r/min繼續攪拌4h后,8000r/min離心5min;

⑤收集微球,蒸餾水洗滌后冷凍干燥。

實施例3

①取100mg?PSA-PEG加入到1ml二氯甲烷溶液中制備成溶液;

②將50mg阿柔比星加入到①中制得的溶液中,超聲混勻;

③將②制得的溶液加入到15ml?1%PVA溶液中;

④降低轉速至200r/min繼續攪拌4h后,8000r/min離心5min;

⑤收集微球,蒸餾水洗滌后收集。

實施例4

①取160mg聚酸酐-聚乙二醇共聚物(PSA-PEG)加入到2ml二甲基亞砜和二氯甲烷(8∶2)中制備成有機相;

②將40mg多柔比星加入到①中,混勻后,放置于1%聚乙烯醇中超聲;

③將②中溶液置于聚乙烯醇溶液中攪拌;

④除去③中有機溶劑,離心收集,得到納米粒溶液。

實施例5

①將柔紅霉素和聚乳酸羥基乙酸-聚乙二醇共聚物(PLGA-PEG)800mg用3ml二氯甲烷和1ml?N,N-二甲基甲酰胺在30℃水浴中作用使其溶解并高速攪拌;

②把①中加入到含有1%聚乙烯醇至100ml,充分混勻;

③室溫攪拌揮發2h,得納米粒溶液;

④在4℃,離心20min后收集所得納米粒;

⑤將④中所得物用雙蒸水洗滌三次即為載藥納米粒。

實施例6

①取300mg聚酸酐(PSA)加入到3ml二氯甲烷中制備成有機相;

②將40mg伊達比星加入到①中制得的有機相中;

③取丙二醇嵌段聚醚和吐溫80(1∶1)制成含乳化劑為4%的水溶液,并向其中加入葡聚糖70,調節溶液PH為8;

④運用納米沉降法將制得的有機相滴加至③制得的水相中;

⑤攪拌除去有機溶劑,得到納米粒溶液,離心收集。

實施例7

①用0.01mol·L-1的氫氧化鈉溶液作為溶劑;

②取①溶劑10ml加入100μl羥丙基甲基纖維素,攪拌使其均勻;

③向步驟②制得的溶液中加入50μl卡波姆934,攪拌使其混合均勻;

④向步驟③制得的溶液中加入40mgPSA-PEG,攪拌使其混合均勻;

⑤向上述溶液中加入1mg阿柔比星;

⑥稱取1.8g泊洛沙姆407加入到④所制得的溶液中,于磁力攪拌下使其分散均勻,4℃條件放置24小時以上,使凝膠充分溶脹,分散均勻得到澄明的溶液,既得阿柔比星水凝膠。

實施例8

①用0.01mol·L-1的氫氧化鈉溶液作為溶劑;

②取①溶劑10ml加入80μl羥丙基甲基纖維素,攪拌使其均勻;

③向步驟②制得的溶液中加入50μl海藻酸鈉,攪拌使其混合均勻;

④向步驟③制得的溶液中加入40mgPSA-PEG,攪拌使其混合均勻;

⑤向上述溶液中加入1mg米托蒽醌;

⑥稱取1.8g泊洛沙姆407加入到④所制得的溶液中,于磁力攪拌下使其分散均勻,4℃條件放置24小時以上,使凝膠充分溶脹,分散均勻得到澄明的溶液,既得米托蒽醌水凝膠。

實施例9

①稱取0.9g磷脂、0.3g膽固醇于50ml小燒杯中,加無水乙醇1-2ml,置于65-70℃水浴中,攪拌使溶解,旋轉該小燒杯使磷脂的乙醇液在杯壁上成膜,用吸耳球輕吹風,將乙醇揮去;

②另取多柔比星溶液30ml于小燒杯中,同置于65-70℃水浴中,保溫,待用;

③取預熱的多柔比星溶液30ml,加至含有磷脂和膽固醇脂質膜的小燒杯中,65-70℃水浴中攪拌水化10min。隨后將小燒杯置于磁力攪拌器上,室溫攪拌30-60min,混勻即得多柔比星脂質體。

效果實驗如下:

1、動物模型的建立及分組:

運用高氧環境誘發鼠的虹膜新生血管,將剛剛出生的C57小鼠200只與同窩的母鼠放入高壓氧艙內,通過進氧管通入100%濕化的純氧氣,開始時將氧氣流入量調節到每分鐘通入8升,使氧氣較為迅速地充滿整個氧艙,連續洗艙后,當氧氣的濃度顯示為75%時,減小氧氣的通入量至每分鐘1升,維持整個氧艙內的氧氣濃度在(75±5)%,隨后每隔一段時間監測氧濃度并維持整個氧艙內的氧氣濃度在合理范圍。每日開艙一次檢查,更換食物和水。給氧1周后,將它們從氧艙中取出,置于正常環境中飼養,將其隨機分組,分別分為蒽環類抗生素普通制劑用藥組(用羧甲基纖維素鈉、甘露醇助溶多柔比星后,以混懸劑形式注射),實施例9組(實施例的納米制劑、微球制劑、水凝膠制劑、脂質體制劑)。模型組和未經受高氧環境的正常小鼠(正常對照組),一共12組。

2、動物給藥及處置:

在動物模型建立以后,分別在動物模型建立后的第一天對各個組進行給藥。治療組分別為蒽環類抗生素普通制劑用藥組(用羧甲基纖維素鈉、甘露醇助溶多柔比星后,以混懸劑形式注射),實施例組(實施例的納米制劑、微球制劑、水凝膠制劑、脂質體制劑)。除模型組和正常對照組外,其他各個治療組均眼內注射5μg藥物或含5μg藥物的載藥納米粒(微球、納米粒、水凝膠或脂質體)。正常組為沒有新生血管性青光眼的正常的鼠。正常對照組和模型組均眼內注射0.1mL的PBS溶液。每組均給藥一次,第14天處死各組一半動物,進行實驗觀察,實驗持續四周后結束治療,即第28天處死各個組剩余的鼠,進行實驗觀察。

3、實驗方法:

分別在第14天和第28天,將小鼠處死后進行眼球摘除,將周邊的脂肪組織除去,角膜開口,放入組織固定盒中,而后置于4%多聚甲醛的DEPC-PBS緩沖液中,4℃冰箱固定48h。常規脫水、透明、石蠟包埋,包埋時注意眼球的放置需呈矢狀位,使得切片為角膜至視乳頭方向。連續6μm厚度切片,HE染色片觀察虹膜新生血管管腔數。HE染色好的切片,每只眼球選擇多張,在光學顯微鏡下計數每張切片上虹膜組織形態結構,計數時取視野下5mm2面積下的新生血管計數并取平均值。

從各組中隨機抽取未經染色的切片,用鏈親合素法對血管內皮生長因子(VEGF)進行免疫組織化學檢測。用緩沖液代替一抗為陰性對照,熒光素抗體標記,激光共聚焦顯微鏡圖象分析系統比較各組VEGF蛋白表達。按如下步驟操作:1、石蠟切片,常規脫蠟至水;2、蒸餾水沖洗,PBS浸泡5min;3、滴加正常山羊血清工作液,室溫孵育20min,而后倒去血清;4、滴加小鼠VEGF?IgG工作液后4℃過夜;5、PBS沖洗,而后滴加適量生物素標記山羊抗小鼠二抗IgG工作液,隨后放入37℃水浴箱中孵育20min后PBS沖洗;6、向其滴加熒光素標記物;7、用甘油封片,在激光共聚焦顯微鏡圖象分析系統下比較各個實驗組的VEGF表達情況。

同時鏡下觀察各個組虹膜的病理情況,記錄并比較。

藥效學結果:

各個實驗組視野下新生血管數的數目檢測比較:

各個動物實驗組新生血管數的檢測結果(14天):

各個動物實驗組新生血管數的檢測結果(28天):

虹膜新生血管造模成功后,通過各組虹膜中新生血管比較中可以看出:在第14天,實施例組新生血管數目較模型組有明顯減少,與模型組比較,差異有顯著統計學意義;同時各個實施例組較蒽環類抗生素普通制劑用藥組新生血管數目亦減少,有顯著性差別。可以看出在半個月內,各個實施例組在治療虹膜新生血管的疾病中均顯示良好效果,但是還沒有完全恢復正常,蒽環類抗生素普通制劑組也顯示了療效。在第28天的比較中,可以看出實施例各組比模型組有很大差異,其中部分實施例組已和正常組的新生血管數目非常接近,差異不大。治療組中,蒽環類抗生素普通制劑組較實施例各組效果略差,由此可以得出實施例各組表現出更好的治療作用。

血管內皮生長因子表達結果比較:

各個動物實驗組虹膜組織切片免疫組織化學檢測血管內皮生長因子的表達結果(14天):

各個動物實驗組虹膜組織切片免疫組織化學檢測血管內皮生長因子的表達結果(28天):

通過各組虹膜中血管內皮生長因子比較中可以看出:在第14天,實施例各組較普通制劑組更具有抑制新生血管的能力,差異有統計學意義,同時從VEGF的表達中也可以看出,各個實施例組與模型組的差異有統計學意義,實施例各組表現出控制新生血管的態勢。可以看出在半個月內,各個實施例組在治療虹膜新生血管的疾病中均顯示良好效果,但是還沒有完全恢復正常,蒽環類抗生素普通制劑組也顯示了療效。在第28天的比較中,可以看出實施例組比模型組有很大差異,各個實施例組較好的抑制新生血管。治療組中,實施例各組顯示出比普通制劑組更好的治療作用。

最終的病理圖片觀察結果:

第14天的病理圖片顯示:模型組的病理圖片中可見虹膜表面的新生血管。組織病理學觀察新生的血管為毛細血管。實施例組可見少量的虹膜新生血管,主要位于虹膜前緣層和基質內,血管擴張不明顯,未見虹膜前表面血管膜和纖維血管膜及脫落的色素細胞。實施例組顯示出比模型組的癥狀有所減輕。蒽環類抗生素普通制劑組的病理改變情況處于實施例組和模型組之間。

第28天的病理圖片顯示:模型組的病理圖片中可見虹膜新生血管,且切片中前緣層新生血管量最多,虹膜內可見血管腔四面呈不規則擴張。實施例組恢復較好,比模型組展示出完全不同的病理情況,未見不規則血管擴張,鏡下顯示實施例各組少見虹膜新生血管,非常接近正常組的病理情況,實施例各組顯示了較好的治療效果。普通制劑組的新生血管情況比較模型組亦有差別,顯示出較好的療效。

由此得出,實施例各組比模型組顯示出非常好的治療效果,均能治療新生血管性青光眼疾病。實施例各組比普通治療組亦有顯著性差異,實施例各組比普通制劑治療組有更好的效果。

顯然,本發明的上述實施例僅僅是為清楚地說明本發明所作的舉例,而并非是對本發明的實施方式的限定。對于所屬領域的普通技術人員來說,在上述說明的基礎上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無法對所有的實施方式予以窮舉。凡是屬于本發明的技術方案所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發明的保護范圍之列。

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