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一種插核后珍珠囊輔助成型方法.pdf

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一種 插核后 珍珠 輔助 成型 方法
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摘要
申請專利號:

CN200710068205.3

申請日:

20070424

公開號:

CN101036450A

公開日:

20070919

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A01K61/00,C12N5/06 主分類號: A01K61/00,C12N5/06
申請人: 詹偉建
發明人: 張高亮,詹偉建,邱咸,王堅,鄭蔣江,邵偉煥,張康
地址: 311800浙江省諸暨市山下湖鎮尚山村橋外43號
優先權: CN200710068205A
專利代理機構: 杭州天勤知識產權代理有限公司 代理人: 胡紅娟
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法律狀態
申請(專利)號:

CN200710068205.3

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明公開了一種插核后珍珠囊輔助成型方法,包括以下步驟:(1)切取珠蚌的前段外套膜組織;(2)在20-25℃溫度,pH值為6.9-8.3下,用蛋白酶酶解外套膜組織,進行離散,得到細胞組織;(3)采用高速離心設備對步驟(2)中得到的細胞組織進行分離,制得細胞液;(4)對所得細胞液進行中和處理;(5)將中和后的細胞液浸泡于保護液中備用;(6)取適量步驟(5)得到的細胞液,滴于插核手術后的珠蚌術后傷口,細胞液與外套膜、珠核融合生長,形成珍珠囊。本發明成功地將細胞工程方法運用于珍珠培育,與常規育珠法相比,細胞囊形成時間可縮短10天,珠質明顯提高,大大降低了畸形珠和無珍珠層的素珠的形成率。

權利要求書

1.一種插核后珍珠囊輔助成型方法,其特征在于包括以下步驟:(1)切取珠蚌的前段外套膜組織;(2)在20-25℃溫度,PH值為6.9-8.3下,用蛋白酶酶解切取的外套膜組織,進行離散,得到細胞組織;(3)采用高速離心設備對步驟(2)中得到的細胞組織進行分離,制得細胞液;(4)對所得細胞液進行中和處理;(5)將中和后的細胞液浸泡于保護液中備用;(6)取適量步驟(5)得到的細胞液,滴于進行插核手術后的珠蚌術后傷口,細胞液與外套膜、珠核融合生長,形成珍珠囊。2.如權利要求1所述的插核后珍珠囊輔助成型方法,其特征在于:所述的珠蚌選用體格健壯的3齡優質雜交三角帆蚌。3.如權利要求1所述的插核后珍珠囊輔助成型方法,其特征在于:步驟(2)中蛋白酶選用胰酶。4.如權利要求1所述的插核后珍珠囊輔助成型方法,其特征在于:步驟(2)中酶解時間為20-40分鐘。5.如權利要求1所述的插核后珍珠囊輔助成型方法,其特征在于:所述的保護液由葡萄糖、單唾液四己酸糖神經節苷脂、諾氟沙星組成,以每升溶液計,葡萄糖含量為40-60g,單唾液四己酸糖神經節苷脂含量為10-15g,諾氟沙星含量為0.8-1.2g。6.如權利要求1所述的插核后珍珠囊輔助成型方法,其特征在于:步驟(5)中的浸泡時間為20-25分鐘。7.如權利要求1所述的插核后珍珠囊輔助成型方法,其特征在于:步驟(6)中細胞液的用量為0.1-0.2ml。

說明書

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技術領域

本發明涉及珍珠培育技術領域,具體來說是指一種珍珠插核后珍珠囊 輔助成型方法。

背景技術

淡水珍珠的培育一般為無核珍珠,采用的方法為在河蚌的外套膜位置 插入細胞小片,該方法生產出來的珍珠稱為無核珍珠。無核珍珠養殖周期 長,生產珍珠直徑較小,經濟效益也較低。

目前,現有的淡水有核珍珠培育借鑒了海水珍珠培育方法,采用的方 法是將珍珠核直接送入河蚌外套膜內育珠的方法。由于插核部位傷口難以 較好的愈合,而形成的珍珠多為尾巴珠、烏珠等劣珠,極少成為優質珠從 而無法進行大面積推廣作業。

發明內容

本發明提供了一種可大大提高定向培育大顆粒正圓有核珍珠的成珠 率與成珠質量的插核后珍珠囊輔助成型方法。

一種插核后珍珠囊輔助成型方法,包括以下步驟:

(1)切取珠蚌的前段外套膜組織;

(2)在20-25℃溫度,PH值為6.9-8.3下,用蛋白酶酶解切取的外套 膜組織,進行離散,得到細胞組織;

(3)采用高速離心設備對步驟(2)中得到的細胞組織進行分離,制 得細胞液;

(4)對所得細胞液進行中和處理;

(5)將中和后的細胞液浸泡于保護液中備用;

(6)取適量步驟(5)得到的細胞液,滴于進行插核手術后的珠蚌術 后傷口,細胞液與外套膜、珠核融合生長,形成珍珠囊。

所述的珠蚌選用體格健壯的3齡優質雜交三角帆蚌。

步驟(2)中蛋白酶選用胰酶,酶解時間為20-40分鐘。

所述的保護液由葡萄糖、單唾液四己酸糖神經節苷脂、諾氟沙星組成, 以每升溶液計,葡萄糖含量為40-60g,單唾液四己酸糖神經節苷脂含量為 10-15g,諾氟沙星含量為0.8-1.2g。

步驟(5)中的浸泡時間為20-25分鐘。

步驟(6)中細胞液的用量為0.1-0.2ml。

本發明在對體外培養的三角帆蚌外套膜外表皮細胞研究的基礎上,獲 得了具有一定的增殖能力且能分泌珍珠質的外套膜外表皮細胞液,并將該 細胞液,與細胞小片以及人工核形成珍珠囊,改變了傳統淡水河蚌外套膜 小片插核育珠法,成功地將細胞工程方法運用于珍珠培育。與常規育珠法 相比,細胞囊形成時間可縮短10天,珠質明顯提高,大大降低了畸形珠 和無珍珠層的素珠的形成率。

整個工藝中,對制備外套膜外表皮細胞液過程的環境條件進行了嚴格 的控制,使外套膜組織酶解較為完全,并能保持酶解細胞的活性,同時, 采用高速離心機對其進行離心,將雜質與有效成分盡量分離,大大提高了 定向培育大顆粒正圓有核珍珠的成珠率與成珠質量。

具體實施方式

實施例1:

(1)切取體格健壯的3齡優質雜交三角帆蚌的前端外套膜組織;

(2)在溫度為20度,PH值為6.9條件下,用胰酶酶解外套膜組織 40分鐘,進行離散,得到細胞組織;

(3)采用高速離心設備對步驟(2)中得到的細胞組織進行分離,制 得細胞液;

(4)對所得細胞液進行中和處理;

(5)稱取葡萄糖40g、單唾液四己酸糖神經節苷脂10g、諾氟沙星0.8g 制備1L保護液,將中和后的細胞液浸泡于所得保護液中20分鐘備用;

(6)取0.1ml步驟(5)得到的細胞液,滴于插核手術后的珠蚌術后 傷口,細胞液與細胞小片、珠核融合生長,形成珍珠囊。

實施例2:

珍珠囊輔助成型步驟同實施例1,環境參數、保護液的原料成分以及 細胞液的用量分別如下:

溫度:21度

PH:7.1

葡萄糖:60g

單唾液四己酸糖神經節苷脂:15g

諾氟沙星:1.2g

酶解時間:38分鐘

浸泡時間:22分鐘

細胞液的用量:0.1ml。

實施例3:

珍珠囊輔助成型步驟同實施例1,環境參數、保護液的組成成分配比 以及細胞液的用量分別如下:

溫度:22度

PH:7.2

葡萄糖:40g

單唾液四己酸糖神經節苷脂:15g

諾氟沙星:1.2g

酶解時間:35分鐘

浸泡時間:22分鐘

細胞液的用量:0.15ml。

實施例4:

珍珠囊輔助成型步驟同實施例1,環境參數、保護液的組成成分配比 以及細胞液的用量分別如下:

溫度:22度

PH:7.3

葡萄糖:60g

單唾液四己酸糖神經節苷脂:10g

諾氟沙星:0.8g

酶解時間:32分鐘

浸泡時間:23分鐘

細胞液的用量:0.18ml。

實施例5:

珍珠囊輔助成型步驟同實施例1,環境參數、保護液的組成成分配比 以及細胞液的用量分別如下:

溫度:23度

PH:7.5

葡萄糖:50g

單唾液四己酸糖神經節苷脂:13g

諾氟沙星:1.0g

酶解時間:30分鐘

浸泡時間:23分鐘

細胞液的用量:0.12ml。

實施例6:

珍珠囊輔助成型步驟同實施例1,環境參數、保護液的組成成分配比 以及細胞液的用量分別如下:

溫度:24度

PH:7.7

葡萄糖:45g

單唾液四己酸糖神經節苷脂:13g

諾氟沙星:1.1g

酶解時間:25分鐘

浸泡時間:20分鐘

細胞液的用量:0.14ml。

實施例7:

珍珠囊輔助成型步驟同實施例1,環境參數、保護液的原料成分以及 細胞液的用量分別如下:

溫度:24度

PH:7.9

葡萄糖:55g

單唾液四己酸糖神經節苷脂:12g

諾氟沙星:0.9g

酶解時間:22分鐘

浸泡時間:20分鐘

細胞液的用量:0.16ml。

實施例8:

珍珠囊輔助成型步驟同實施例1,環境參數、保護液的組成成分配比 以及細胞液的用量分別如下:

溫度:25度

PH:8.3

葡萄糖:58g

單唾液四己酸糖神經節苷脂:11g

諾氟沙星:1.05g

酶解時間:28分鐘

浸泡時間:21分鐘

細胞液的用量:0.2ml。

實施例9:

珍珠囊輔助成型步驟同實施例1,環境參數、保護液的組成成分配比 以及細胞液的用量分別如下:

溫度:20度

PH:7.0

葡萄糖:44g

單唾液四己酸糖神經節苷脂:14g

諾氟沙星:1.15g

酶解時間:30分鐘

浸泡時間:22分鐘

細胞液的用量:0.18ml。

實施例10:

珍珠囊輔助成型步驟同實施例1,環境參數、保護液的組成成分配比 以及細胞液的用量分別如下:

溫度:28度

PH:8.0

葡萄糖:49g

單唾液四己酸糖神經節苷脂:11g

諾氟沙星:0.8g

酶解時間:38分鐘

浸泡時間:23分鐘

細胞液的用量:0.19ml。

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