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一種可降解霉菌毒素的預混合飼料、其制備方法及豬日糧.pdf

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一種 降解 霉菌 毒素 混合 飼料 制備 方法 豬日糧
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摘要
申請專利號:

CN201611258741.5

申請日:

20161230

公開號:

CN106616233A

公開日:

20170510

當前法律狀態:

有效性:

審查中

法律詳情:
IPC分類號: A23L5/20,A23K10/18,A23K50/30 主分類號: A23L5/20,A23K10/18,A23K50/30
申請人: 深圳市前海金卓生物技術有限公司
發明人: 曾李,魏泓,劉建華,崔小燕,王玲玲
地址: 518054 廣東省深圳市前海深港合作區前灣一路1號A棟201室(入駐深圳市前海商務秘書有限公司)
優先權: CN201611258741A
專利代理機構: 深圳市隆天聯鼎知識產權代理有限公司 代理人: 周惠來;劉抗美
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法律狀態
申請(專利)號:

CN201611258741.5

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明提供了一種可降解霉菌毒素的預混合飼料、其制備方法及豬日糧。該預混合飼料包括凝結芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和丁酸梭菌。本發明一實施方式的可降解霉菌毒素的預混合飼料,性質穩定,不吸附維生素和其他營養物質,能高效清除霉菌毒素造成的飼料污染,改善適口性,提高動物食欲,使其增重加快,提早出欄。

權利要求書

1.一種可降解霉菌毒素的預混合飼料,包括凝結芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和丁酸梭菌。2.根據權利要求1所述的預混合飼料,包括25~30質量份凝結芽孢桿菌、20~25質量份枯草芽孢桿菌和20~25質量份丁酸梭菌。3.根據權利要求1所述的預混合飼料,還包括酵母細胞壁和復合維生素。4.根據權利要求3所述的預混合飼料,包括25~30質量份凝結芽孢桿菌、20~25質量份枯草芽孢桿菌、20~25質量份丁酸梭菌、10~15質量份酵母細胞壁和5~10質量份復合維生素。5.根據權利要求4所述的預混合飼料,包括25質量份凝結芽孢桿菌、20質量份枯草芽孢桿菌、20質量份丁酸梭菌、10質量份酵母細胞壁和5質量份復合維生素。6.一種可降解霉菌毒素的預混合飼料的制備方法,包括:配制發酵液;將凝結芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和丁酸梭菌在所述發酵液中分別進行擴大培養,然后經液體深層發酵;以及將發酵完成的各菌分別制成粉劑,按照一定質量比例混合后粉碎,制得所述可降解霉菌毒素的預混合飼料。7.根據權利要求6所述的方法,其中所述質量比例為,凝結芽孢桿菌:枯草芽孢桿菌:丁酸梭菌=(25~30):(20~25):(20~25)。8.一種豬日糧,包含權利要求1至5中任一項所述的可降解霉菌毒素的預混合飼料。

說明書

技術領域

本發明涉及畜牧業的預混合飼料,具體為一種可降解霉菌毒素的預混合飼料。

背景技術

霉菌毒素是由真菌(霉菌)產生的具有毒性的次級代謝產物,主要的霉菌毒素包括:黃曲霉毒素、單端孢霉烯族毒素(T2毒素、嘔吐毒素)、玉米赤霉烯酮、赭曲霉素、煙曲霉素等。

聯合國糧農組織(FAO)估計,全世界谷物25%受霉菌毒素污染,平均有2%的糧食由于霉變不能食用,全世界由于霉菌毒素污染造成每年數千億美元的損失。據美國農業部統計,由于畜禽食用霉菌毒素污染的飼料,畜牧業每年遭受14.4億美元的經濟損失。我國華南、華東乃至華北地區收獲季節雨量較多,農作物在田間就會受到霉菌的污染。因此,解決糧食霉菌毒素污染是一個世界性問題,是解決食品安全和人類健康的大問題。

聯合國糧農組織(FAO)于1995年建議將危害分析與關鍵控制(HACCP)系統應用于霉菌毒素管理,通過加強作物生長、成熟、收獲和貯存等各個環節的控制來最大限度的減少食品和飼料中的霉菌毒素。

霉菌毒素傳統的物理和化學去毒方法存在效果不穩定、營養成分損失大、影響飼料適口性,且難以規模化生產等缺點而不能被廣泛應用到實際生產中。而微生物及生物酶解毒因具有解毒效率高、特異性強、對飼料和環境沒有污染等特點和優勢,備受研究者的關注。

發明內容

為解決上述現有技術中的至少一種缺陷,本發明提供了一種可降解霉菌毒素的預混合飼料,包括凝結芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和丁酸梭菌。

根據本發明的一實施方式,所述預混合飼料包括25~30質量份凝結芽孢桿菌、20~25質量份枯草芽孢桿菌和20~25質量份丁酸梭菌。

根據本發明的一實施方式,所述預混合飼料還包括酵母細胞壁和復合維生素。

根據本發明的一實施方式,所述預混合飼料包括25~30質量份凝結芽孢桿菌、20~25質量份枯草芽孢桿菌、20~25質量份丁酸梭菌、10~15質量份酵母細胞壁和5~10質量份復合維生素。

根據本發明的一實施方式,所述預混合飼料包括25質量份凝結芽孢桿菌、20質量份枯草芽孢桿菌、20質量份丁酸梭菌、10質量份酵母細胞壁和5質量份復合維生素。

本發明一實施方式還提供了一種可降解霉菌毒素的預混合飼料的制備方法,包括:

配制發酵液;

將凝結芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和丁酸梭菌在所述發酵液中分別進行擴大培養,然后經液體深層發酵;以及

將發酵完成的各菌分別制成粉劑,按照一定質量比例混合后粉碎,制得所述可降解霉菌毒素的預混合飼料。

根據本發明的一實施方式,所述質量比例為,凝結芽孢桿菌:枯草芽孢桿菌:丁酸梭菌=(25~30):(20~25):(20~25)。

本發明一實施方式進一步提供了一種豬日糧,包含上述的可降解霉菌毒素的預混合飼料。

本發明一實施方式的可降解霉菌毒素的預混合飼料,性質穩定,不吸附維生素和其他營養物質,能高效清除霉菌毒素造成的飼料污染,改善適口性,提高動物食欲,使其增重加快,提早出欄。

附圖說明

圖1為本發明應用例4的對照組、處理組Ⅰ、處理組Ⅱ的中毒豬陰戶面積影響的統計圖;

圖2A為本發明應用例4中試驗前對照組的母豬陰戶狀況的示意圖;

圖2B為本發明應用例4中試驗后對照組的母豬陰戶狀況的示意圖;

圖3A為本發明應用例4中試驗前處理組Ⅰ的母豬陰戶狀況的示意圖;

圖3B為本發明應用例4中試驗后處理組Ⅰ的母豬陰戶狀況的示意圖;

圖4A為本發明應用例4中試驗前處理組Ⅱ的母豬陰戶狀況的示意圖;

圖4B為本發明應用例4中試驗后處理組Ⅱ的母豬陰戶狀況的示意圖。

具體實施方式

體現本發明特征與優點的典型實施例將在以下的說明中詳細敘述。應理解的是本發明能夠在不同的實施例上具有各種的變化,其皆不脫離本發明的范圍,且其中的描述在本質上是當作說明之用,而非用以限制本發明。

霉菌毒素生物降解指微生物、植物及其代謝產生的酶與毒素作用,使其分子結構中毒性基團被破壞而生成無毒降解產物的過程。以腸道菌群為靶標的,通過無菌動物模型、宏基因組技術,檢測動物腸道菌群正向或負向豐度變化來評價發酵飼料對動物腸道菌群變化。

本發明一實施方式提供了一種可降解霉菌毒素的預混合飼料,包括凝結芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和丁酸梭菌。

本發明一實施方式通過在常規預混料中添加凝結芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、丁酸梭菌等復合微生物活性成分來降解霉菌毒素(例如玉米赤霉烯酮),能有效替代抗生素添加劑,可提高飼料活性,促進動物健康,進而減少飼料原料浪費,提高飼料產業生產性能,并且提高動物免疫力,改善飼料適口性和轉化率等,生產出綠色安全畜牧產品。

丁酸梭菌的主要代謝產物為丁酸,而丁酸是腸道上皮組織細胞的再生和修復的主要營養物質,能有效修復腸道粘膜結構,調節腸道的菌群平衡,增強動物機體的免疫功能。因此,預混合飼料中包含丁酸梭菌對腸道上皮組織的再生和修復有很重要的意義。

于本發明一實施方式中,預混合飼料還包含酵母細胞壁和復合維生素。本發明一實施方式的可降解霉菌毒素的預混合飼料,在凝結芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌脫毒的同時,可通過酵母細胞壁吸附和中和細菌毒素。

本發明一實施方式的可降解霉菌毒素的預混合飼料,采用生物吸附和物理吸附相結合的方式,達到快速高效的吸附多種霉菌毒素的目的,且復合微生物等活性成分對飼料中的維生素、微量元素吸附性差,不破壞飼料營養成分的吸收率,極大地減少了營養成分的損失,且不受飼料加工工藝和高溫影響,無停用時間,無殘留。

于本發明一實施方式中,預混合飼料包括25~30質量份凝結芽孢桿菌、20~25質量份枯草芽孢桿菌和20~25質量份丁酸梭菌。

于本發明另一實施方式中,預混合飼料包括25~30質量份凝結芽孢桿菌、20~25質量份枯草芽孢桿菌、20~25質量份丁酸梭菌、10~15質量份酵母細胞壁和5~10質量份復合維生素。

于本發明另一實施方式中,預混合飼料包括25質量份凝結芽孢桿菌、20質量份枯草芽孢桿菌、20質量份丁酸梭菌、10質量份酵母細胞壁和5質量份復合維生素。

復合維生素可以去除自由基,保護生物膜和肝臟,免受霉菌毒素的氧化損傷。本發明對復合維生素的種類沒有限定,現有的復合維生素均可用于本發明。

本發明對預混合飼料各成分的制備方法沒有限定,各成分均可按照現有的方法制得,混合后即可得到本發明的仔豬復合預混料。例如,本發明一實施方式的可降解霉菌毒素的預混合飼料的制備方法,包括:

a、以常規發酵底物配制發酵液;

b、根據各菌株的特性,將凝結芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和丁酸梭菌分別進行擴大培養,然后經液體深層發酵;

c、終止發酵后采用微囊包被噴霧干燥法,凍干制劑法制成粉劑,所有原料按一定的重量配比混合,攪拌均勻,粉碎成過20目篩的顆粒,制得產品即得到高活性可降解霉菌毒素的復合預混料。

其中,常規發酵底物可以包含玉米粉、蛋白胨、酵母提取物、糖蜜、水等。

本申請一實施方式的預混合飼料,不僅可顯著提高仔豬的平均日增重,改善料肉比,顯著降低仔豬的腹瀉率以及死淘率,提高仔豬的生產性能以及經濟效益,還可以提高母豬的采食量,降低母豬產后感染率,并能提高母畜的產奶量和乳汁率。

本申請一實施方式的預混合飼料,可使動物生殖系統免受霉毒素侵害,減少輸卵管炎等生殖疾病,從而改善母畜發情、泌乳,減少死胎流產等,提高產仔數,使幼崽成活率高,提高了繁殖效率。本申請一實施方式的預混合飼料,還可保護免疫系統免受霉菌毒素的侵害,提高抗病率,減少發病率,并能高效清除霉菌毒素造的飼料污染。

下面,通過具體實施例對本發明一實施方式的可降解霉菌毒素的預混合飼料做進一步說明。其中,所使用的枯草芽孢桿菌、凝結芽孢桿菌及丁酸梭菌均購自華中農業大學微生物研究所;枯草芽孢桿菌的保藏號為GIM1.254,凝結芽孢桿菌的保藏號為GIM1.204,丁酸梭菌的保藏號為GIM1.676。如無特別說明,應用例中所使用的基礎飼料的組成為:

基礎日糧組成

原料 玉米 麩皮 豆粕 菜餅 預混料 磷酸氫鈣 石粉 食鹽 日糧組成% 70 13 10 5 1 0 0.64 0.36

實施例

可降解霉菌毒素的預混合飼料的制備

a、以常規發酵底物(玉米粉、蛋白胨、酵母提取物、糖蜜、水)配制發酵液;

b、根據枯草芽孢桿菌、凝結芽孢桿菌及丁酸梭菌的特性分別進行擴大培養,然后先好氧后厭氧的方式進行液體深層發酵;

c、終止發酵后采用微囊包被噴霧干燥法,凍干制劑法將上述三種菌制成粉劑,按照20質量份枯草芽孢桿菌、25質量份凝結芽孢桿菌及20質量份丁酸梭菌的重量配比將三者混合,攪拌均勻,粉碎成過20目篩的顆粒,制得產品即得到高活性可降解霉菌毒素的預混合飼料。

應用例1活性度試驗

以腸道菌群為靶標的活性飼料評價方法:通過無菌動物、宏基因組技術檢測本申請實施例制得的預混合飼料對動物腸道菌群正向或負向波動來評價該預混合飼料的活性度。

實驗動物與處理:

給豬源菌群小鼠模型(重慶三軍醫大學無菌實驗室提供)分別飼喂實施例制得的預混合飼料(添加量5g/kg)、化學脫霉劑(蒙脫石,添加量5g/kg)、基礎飼料

主要試劑與儀器:

DNA提取試劑盒、培養基、離體恒化器、PCR擴增儀、超低溫冰箱(-80℃)、超凈工作臺、顯微鏡等。

1.體內活性因子評價

以豬源菌群小鼠模型為實驗動物,通過16S rRNA檢測方法,檢測生物脫霉劑對腸道菌群的正向調控作用。

1.1實驗動物與處理

將30只小鼠(6周齡,雌雄各半)分為3組,每組10只。對照組飼喂基礎飼料,A組飼喂基礎飼料+實施例制得的預混合飼料,B組飼喂基礎飼料+化學脫霉劑。

1.2樣本采集

自飼喂后的第4周起定期取小鼠新鮮糞便樣品(3份)并拍照,裝于2mL無菌EP管中,凍藏于-80℃待用。

1.3DNA提取

取小鼠糞便20mg,于2mL螺口管中,加入700μL裂解液;具體參照天根的糞便基因組DNA提取試劑盒的說明進行。

1.4 16S rRNA測序

每組3個重復,共9個樣品測序。

2.體外活性因子評價

以接種豬腸道菌群的離體恒化器為模型,通過16S rRNA檢測方法,檢測本申請實施例制得的預混合飼料對腸道菌群的正向調控作用。

2.1離體恒化器分組和處理

使用3套離體恒化器模型,分為空白對照組、預混合飼料組及化學脫霉劑組,離體模型接種豬腸道菌群14d后,向預混合飼料組添加本申請實施例的預混合飼料2.5g,向化學脫霉劑組添加脫霉劑2.5g,連續作用8天。

2.2樣本采集

糞便接種發酵罐后,在加預混合飼料及脫霉劑8天后采集培養液,裝于2mL無菌EP管中,凍藏于-80℃待用,用于細菌數量檢測和菌群結構分析。

2.3DNA提取和16S rDNA測序

方法同1.3與1.4。

3.實驗結果

通過16S rDNA測序表明本申請實施例的預混合飼料對腸道菌群有正向激活作用:

(1)擬桿菌、梭菌、雙歧桿菌、乳酸桿菌等有益共生菌群的豐度上調;

(2)腸球菌、腸桿菌等條件性致病菌的豐度下調;

(3)沙門氏菌和致病大腸桿菌等外源致病菌群消失。

應用例2仔豬解毒試驗

將96只平均體重25±0.5kg健康的三元仔豬,隨機分成3個處理,每個處理4個重復,每個重復8頭仔豬,飼養期為21天。

空白對照組:飼喂基礎日糧(正常玉米);

霉玉米對照組:飼喂霉變玉米等量替換基礎日糧中20%的正常玉米;

試驗組:飼喂霉變玉米等量替換基礎日糧中20%的正常玉米+1kg/t實施例的預混合飼料。

試驗地點:河南某養殖試驗場

表1實施例的預混合飼料和霉玉米對小豬的影響

表1的結果顯示:霉玉米對照組可以導致仔豬拉稀,本申請實施例的預混合飼料可以防止仔豬拉稀,對霉玉米具有解毒作用。霉玉米對照組試驗小豬采食2~3天后,個別小豬出現拉稀和陰門紅腫現象,采食量下降,小豬生長緩慢。用液體狀的本申請實施例的預混合飼料噴涂于基礎飼料表面飼喂霉對照組小豬,2~3天后拉稀現象消失,5~7天后陰門紅腫現象消失,后期采食量和日增重恢復到正常水平。

應用例3對斷奶仔豬的促生長作用

本試驗選用35±1日齡、平均體重7.86±0.06kg健康的三元(杜×長×大)雜交斷奶仔豬90頭,隨機分為3個處理組,每個處理組設5個重復,每個重復6頭仔豬(公母各半),各重復組間初始體重無顯著性差異(p>0.05)。3個處理組分別為:空白對照組(基礎日糧)、抗生素對照組(金霉素的添加量為75mg/kg飼料)和試驗組(本申請實施例的預混合飼料添加量1g/kg飼料)。仔豬自由采食和飲水,飼養管理和免疫程序參照仔豬飼養管理手冊。

表2本申請實施例的預混合飼料對斷奶仔豬的促生長作用

表2的結果顯示:本申請實施例的預混合飼料可顯著提高仔豬的平均日增重(p<0.05),改善料肉比,并顯著降低仔豬的腹瀉率以及死淘率(p<0.05),提高仔豬的生產性能以及經濟效益,能有效替代抗生素添加劑。

應用例4對玉米赤霉烯酮中毒青年母豬癥狀的緩解效果

選擇平均體重42~45kg左右的三元雜交青年母豬18頭,隨機分為3個處理,每個處理6個重復,每個重復1頭豬。對照組飼喂正常日糧,處理組Ⅰ、Ⅱ前10天飼喂含玉米赤霉烯酮(240ppb)日糧,處理組Ⅱ第11天開始飼喂含玉米赤霉烯酮(240ppb)同時添加本申請實施例的預混合飼料(2kg/t)的日糧。

圖1示出了添加本申請實施例的預混合飼料對玉米赤霉烯酮中毒豬陰戶面積的影響;圖2A至4B示出了試驗前后母豬陰戶變化情況。由圖1至4B可知:飼喂玉米赤霉烯酮含量為240ppb的日糧可引起青年母豬玉米赤霉烯酮中毒,使豬的陰戶面積增大,出現外陰紅腫現象,在霉變日糧中添加本申請實施例的預混合飼料可緩解豬的中毒癥狀,使陰戶面積恢復到正常組的水平。

應用例5對母豬的影響

將40頭母豬按照體重、胎次隨機分成兩組,對照組飼喂基礎日糧,試驗組飼喂基礎日糧+0.1%本申請實施例的預混合飼料寶,從產前一周開始飼喂,至產后三周斷奶結束。

表3本申請實施例的預混合飼料對母豬繁殖和生產性能的改善

由表3可知:本申請實施例的預混合飼料可以提高母豬的采食量,降低母豬產后感染率,可以提高仔豬的日增重,降低仔豬的腹瀉率和淘汰率。

除非特別限定,本發明所用術語均為本領域技術人員通常理解的含義。

本發明所描述的實施方式僅出于示例性目的,并非用以限制本發明的保護范圍,本領域技術人員可在本發明的范圍內作出各種其他替換、改變和改進,因而,本發明不限于上述實施方式,而僅由權利要求限定。

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