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綠色木霉耐藥性菌株及其與殺菌劑的協同應用技術.pdf

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綠色 耐藥性 菌株 及其 殺菌劑 協同 應用技術
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摘要
申請專利號:

CN200710057188.3

申請日:

20070424

公開號:

CN101061806A

公開日:

20071031

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A01N63/04,C12N1/14,A01P3/00,C12R1/885,A01N37/50,A01N43/38 主分類號: A01N63/04,C12N1/14,A01P3/00,C12R1/885,A01N37/50,A01N43/38
申請人: 天津市植物保護研究所
發明人: 王勇,王萬立,劉春艷,郝永娟,楊秀榮,劉曉琳
地址: 300112天津市西青區外環西線39公里
優先權: CN200710057188A
專利代理機構: 代理人:
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法律狀態
申請(專利)號:

CN200710057188.3

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明涉及一種利用綠色木霉耐藥性菌株及其與殺菌劑的協同應用的方法。本發明以綠色木霉耐藥性菌株(Trichoderma viride)進行人工發酵生產綠色木霉耐藥性菌株孢子,將其與特異性殺菌劑相混合利用,提高綠色木霉的生防活性及田間化學藥劑的施用劑量,主要包括由綠色木霉(Trichoderma viride)耐藥性菌株的誘發及其篩選,殺菌劑(速克靈、醚菌酯等)與綠色木霉耐藥性菌株的協同作用,及通過綠色木霉耐藥性菌株發酵孢子、殺菌劑相協同的復合制劑及其施用技術,本發明的特征在于誘發具防治植物病害活性綠色木霉的耐藥性,生物制劑中加入殺菌劑、孢子保護劑等的協同制劑配方和施用技術。此項技術可解決生防制劑應用中所面臨的問題,同時減少化學農藥的施用劑量,實現控制植物病害的有益互作,對提高生防制劑的防治效果,減少化學農藥的使用劑量及農藥殘留有一定的幫助。

權利要求書

1、一種將綠色木霉耐藥性菌株與殺菌劑的混合施用的方法,包括由綠色木霉耐藥性菌株的誘發及其篩選,殺菌劑(速克靈、醚菌酯等)與綠色木霉耐藥性菌株的協同作用,及通過綠色木霉耐藥性菌株發酵孢子、殺菌劑相協同的復合制劑及其施用技術,本發明的特征在于誘發具生物防治植物病害活性綠色木霉(Trichoderma?viride)的耐藥性,生物制劑中加入殺菌劑、孢子保護劑等的協同制劑配方和施用技術。

說明書

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技術領域

本發明涉及綠色木霉耐藥性菌株及其與殺菌劑的協同應用的方法,具體涉及一種綠色木霉耐藥 性菌株的誘發及其篩選技術,及綠色木霉耐藥性菌株與殺菌劑(速克靈、醚菌酯)的相協同的復合 制劑及其施用技術。

背景技術

木霉是自然界中普遍存在的一類真菌,在土壤、植物根圍、葉圍及種子、球莖表面經常可以分 離到。近些年人們發現某些木霉是植物病原真菌的寄生菌或拮抗菌,如哈茨木霉(T.harzianum)、 鉤狀木霉(T.hamatum)、綠色木霉(T.viride)可以防治真菌病害。迄今為止有關木霉在生防方面的 研究已開展近70年,在國外已經出現了商品化的木霉制劑。如以防治李屬果樹銀葉病 (Chondrostereum?purpureum)的木霉制劑在西歐已商品化生產;以色列的Makhteshim?Agan公司開 發的以哈茨木霉T39菌株為發酵液的生防制劑,商品名Trichodex,劑型為25%可濕粉,它可以用于 防治灰霉病菌(Botrytis?cinerea)、菌核病菌(Scleratina?sclerotiorum)、葉霉病(Cladosporium?fulvum)、 霜霉病(Pseudoperonasplra?cubensis)和白粉病(Sphaerotheca?fuliginea)等葉部病害,在國內也有 研究利用木霉菌控制植物病害。

從公開報道的文獻中可以看到人們對生防木霉菌的研究,大多集中在菌株的篩選、鑒定、發酵 培養及其利用等方面。其中,我們所篩選的綠色木霉(Trichoderma?viride)是一種具有廣譜抑病能 力的真菌,可以通過拮抗、競爭、寄生、誘導抗性、促生等作用方式,對多種植物病害具有明顯的 防治作用。但是由于木霉菌制劑為活孢子制劑,單獨使用控制作物病害會受到作用方式等的影響, 造成施用效果欠佳,具一定遲效性,且存在活性不穩問題,因此阻礙了生物制劑的規模化生產應用。

目前,在農業生產中仍以使用化學藥劑為主,且生物農藥還不能解決生產中存在的所有問題, 在使用過程中化學藥劑會對生物制劑產生抑制作用,因此造成生物制劑與化學藥劑兩者之間成為一 對矛盾體。因而為解決生防制劑應用中所面臨的問題,同時減少化學農藥的施用劑量,提出利用綠 色木霉的耐藥性菌株,將耐藥性綠色木霉與化學藥劑混合使用,通過施用對植物病原菌有特異性的 殺菌劑并引進耐藥性拮抗木霉菌株,實現控制植物病害的有益互作。對于提高生防制劑的防治效果, 減少化學農藥的使用劑量及農藥殘留將有一定的幫助。

發明內容

本發明旨在研究一種利用綠色木霉耐藥性菌株及其與殺菌劑的協同應用的方法。

本發明是通過以下技術方案實現上述發明目的的。

主要包括將綠色木霉耐藥性菌株與殺菌劑的混合施用的方法,包括由綠色木霉(Trichoderma viride)耐藥性菌株的誘發及其篩選,殺菌劑(速克靈、醚菌酯等)與綠色木霉耐藥性菌株的協同作 用,及通過綠色木霉耐藥性菌株發酵孢子、殺菌劑相協同的復合制劑及其施用技術,本發明的特征 在于誘發具防治植物病害活性綠色木霉的耐藥性,生物制劑中加入殺菌劑、孢子保護劑等的協同制 劑配方和施用技術。

具體實施方式

下面進一步詳述本發明。

1、綠色木霉對速克靈、醚菌酯耐藥性菌株的篩選及誘導綠色木霉菌株耐藥性的研究

經對具強拮抗灰葡萄孢霉活性的綠色木霉菌,采用射線照射(30W、直線距離30cm、照射30min) 和藥劑亞致死劑量(500μg/ml)方法,進行綠色木霉耐藥性菌株的人工誘發,并進行耐藥性菌株的 篩選,獲得高耐藥性菌株3株、中等耐藥性菌株28株、敏感性菌株3株。其中高耐藥性菌株分別為 Tr9701、Tr2008、Tr2009,具有較強的耐受速克靈、醚菌酯藥劑活性。

對篩選的高耐藥菌株孢子懸液于藥劑選擇壓力高的條件下(500μg/ml)培養,3天內即可長出較 為旺盛的菌落。

經亞致死劑量藥劑馴化法對篩選的高耐藥性綠色木霉菌株進行誘導綠色木霉菌對速克靈、醚菌 酯耐藥性試驗,由試驗結果可知速克靈、醚菌酯對綠色木霉耐藥菌株不同培養世代的藥劑敏感性影 響較少,差異不顯著,速克靈和醚菌酯對綠色木霉菌在藥劑亞致死劑量的不同培養世代抑菌活性無 顯著差異。

2、速克靈、醚菌酯與綠色木霉對病菌協同作用的影響

采用紙碟法進行速克靈與綠色木霉協同對灰葡萄孢霉抑菌率進行試驗,速克靈和綠色木霉分別 設有效含量不等的4種配比組合,速克靈有效成分與綠色木霉菌劑(孢子數為5×108個孢子/g)的 配比分別為1%和98%、5%和90%、10%和80%、20%和60%,以50%速克靈WP與綠色木霉菌劑 (活孢子數5×108個/g)處理為對照,分別配制成1000倍、2000倍液濃度進行試驗。由結果可知 (見表1),速克靈和綠色木霉協同作用對黃瓜灰霉病菌的抑菌作用明顯提高,速克靈與綠色木霉菌 可濕性粉劑的四種配比1000倍液下,協同作用抑菌率為67.5~85.0%,較單獨采用綠色木霉菌可濕 性粉劑及50%速克靈可濕性粉劑為高,單獨作用平均抑菌率分別為68.8%、45.0%。其中速克靈與綠 色木霉(1∶8)1000倍液協同作用抑菌率為85.0%,2000倍液的協同作用抑菌率為54.4%,增效明 顯,皆較綠色木霉菌和速克靈可濕性粉劑單獨使用的抑菌率明顯增加。

?????表1、速克靈濃度與綠色木霉菌可濕性粉劑對黃瓜灰霉病菌的協同作用

附:2%、10%等表示添加速克靈粉劑有效成分含量分別為2%、10%等。綠色木霉制成木霉孢子粉可濕性粉劑 劑型,活孢子數為5×108個/克,98%、90%等表示添加的綠色木霉粉劑比例。

通過對高拮抗灰葡萄孢霉并天然抗耐速克靈的綠色木霉耐藥性菌株進行協同作用研究,試驗表 明,綠色木霉菌劑與速克靈結合施用對黃瓜灰霉病具有明顯的協同作用。菌和藥處理下,病原菌菌 絲伸長速度緩慢,致病率降低,表明被速克靈抑制的病原菌可能較易被綠色木霉菌侵染。

通過速克靈濃度對協同作用影響試驗,獲得藥和菌之間的最佳配比(1∶8),經藥菌復合研制出 其協同制劑木·速可濕性粉劑。

????????表2、醚菌酯濃度與綠色木霉菌對黃瓜白粉病菌的協同作用

附:4%、6%等表示添加醚菌酯有效成分含量分別為4%、6%等。綠色木霉制成木霉孢子粉可濕性粉劑劑型, 活孢子數為5×108個/克,92%、88%等表示添加的綠色木霉粉劑比例。

采用葉片漂浮法進行醚菌酯與綠色木霉協同對黃瓜白粉病菌抑菌試驗,結果可知(見表2),醚 菌酯和綠色木霉協同作用對黃瓜白粉病菌的抑菌作用明顯提高,醚菌酯與綠色木霉菌劑的四種配比 1000倍液下,協同作用抑菌率為72.4~81.7%,綠色木霉菌可濕性粉劑及50%醚菌酯干懸浮劑單獨 作用平均抑菌率分別為72.3%、78.8%,協同作用后明顯較單獨施用抑制效果為高。其中醚菌酯干懸 浮劑與綠色木霉菌可濕性粉劑(8∶84)1000倍液協同作用抑菌率為81.7%,增效明顯,較綠色木霉 菌和醚菌酯單獨使用的抑菌效果有明顯增加。

通過醚菌酯濃度對協同作用影響試驗,獲得藥和菌之間的最佳配比(1∶10),經藥菌復合研制 出其協同制劑木·醚可濕性粉劑。

3、速克靈、醚菌酯與綠色木霉對病菌協同制劑的配制

綠色木霉活菌制劑對蔬菜灰霉、白粉病等均有良好的防治效果,但田間施用過程中,由于生 物菌劑自身作用方式的差異以及環境、施用技術等因素,均會影響其防治效果。我們通過人工誘 發綠色木霉耐藥性菌株,利用其耐藥活性,同時加入孢子保護劑,配制成速克靈、醚菌酯與綠色 木霉的復配制劑。

45%木·速可濕性粉劑配方:耐藥綠色木霉孢子、速克靈原藥、硅藻土、可溶性淀粉、黃原 膠和SDS和幾丁質分別按照40%、5%、46.7%、5%和3.3%的比例混合均勻,并進行細化細度95 %以上可通過100目篩,制成品外觀松散、流動性好。

45%木·速WP品質標準為:

有效成分含量:≥45%,(孢子數>2×108孢子/克,速克靈≥5%);水分:<5%;

細度(過100目篩,%):≥95%。

44%木·醚可濕性粉劑配方:耐藥綠色木霉孢子、醚菌酯原藥、硅藻土、可溶性淀粉、黃原 膠和SDS和幾丁質分別按照40%、4%、47.7%、5%和3.3%的比例混合均勻,并進行細化細度95 %以上可通過100目篩,制成品外觀松散、流動性好。

44%木·醚WP品質標準為:

有效成分含量:≥44%,(孢子數>2×108孢子/克,醚菌酯≥4%);水分:<5%;

細度(過100目篩,%):≥95%。

4、45%木·速WP與44%木·醚WP防治蔬菜灰霉病、黃瓜白粉病的使用效果

于室內采用瓜條進行協同制劑45%木·速WP防治黃瓜灰霉病試驗,結果見表3。由試驗結果 可知,45%木·速WP、50%綠色木霉WP、50%速克靈WP1000倍液防治效果分別為67.6%、51.5% 和62.5%,表明速克靈對綠色木霉防治黃瓜灰霉病具有增效作用,菌+藥處理較單獨用菌、藥能進 一步提高防效。

??表3.45%木·速WP協同防治黃瓜灰霉病藥效試驗(室內) ??藥劑 ??濃度(倍) ??病斑直徑(mm) ??抑菌率(%) ??平均 ??抑菌率 ??重復I ??重復II ??重復 ??重復II ??45%木·速WP ??500 ??4.10 ??5.64 ??76.6 ??65.8 ??71.2 ??1000 ??6.18 ??4.87 ??64.7 ??70.5 ??67.6 ??1500 ??7.88 ??9.04 ??55.0 ??45.2 ??50.1 ??50%綠色木霉WP ??500 ??6.00 ??7.25 ??65.7 ??56.1 ??60.9 ??1000 ??7.63 ??10.3 ??56.4 ??46.6 ??51.5 ??1500 ??9.00 ??8.88 ??48.6 ??46.2 ??71.2 ??50%速克靈WP ??1000 ??7.42 ??5.38 ??57.6 ??67.4 ??62.5 ??空白對照 ??17.5 ??16.5 ??- ??- ??-

于室內采用葉片漂浮法進行進行協同制劑44%木·醚WP防治試驗,結果見表4。由試驗結果 可知,44%木·醚WP500倍、50%綠色木霉WP50倍、50%醚菌酯干懸浮劑3000倍的防治效果分別 為82.7%、74.9%和78.4%,表明醚菌酯對綠色木霉防治黃瓜白粉病具有增效作用,菌+藥處理較單 獨用菌、藥能進一步提高防效。

表4.45%木·醚WP協同防治黃瓜白粉病藥效試驗(室內) ??藥劑處理 ??濃度(倍) ??病情指數 ??防治效果(%) ??平均防效 ??(%) ??重復I ??重復II ??重復I ??重復II ??45%木·醚WP ??500 ??2.55 ??2.23 ??81.1 ??84.3 ??82.7 ??1000 ??3.25 ??2.96 ??75.9 ??79.2 ??77.5 ??1500 ??3.86 ??3.65 ??71.4 ??74.3 ??72.9 ??50%綠色木霉WP ??500 ??3.20 ??3.76 ??76.3 ??73.5 ??74.9 ??1000 ??4.35 ??3.98 ??67.8 ??72.0 ??69.9 ??1500 ??4.55 ??5.21 ??66.3 ??63.3 ??64.8 ??50%醚菌酯干懸浮劑 ??3000 ??3.35 ??2.61 ??75.2 ??81.6 ??78.4 ??空白對照 ??- ??13.50 ??14.20 ??- ??- ??-

由田間藥效試驗結果可知(見表5、6),45%木·速WP和44%木·醚WP對黃瓜灰霉病、白 粉病均有較好的防治效果,3次藥后調查其防治效果優于或與兩對照藥劑50%速克靈WP和50%醚 菌酯干懸浮劑的防效無顯著差異,同等施用劑量的防治效果明顯優于50%綠色木霉WP的防效,因 此認為45%木·速WP和44%木·醚WP可以在生產上推廣應用,具有良好的開發前景。

建議使用45%木·速WP防治黃瓜灰霉病,施用劑量為500~1500倍液,44%木·醚WP防治 黃瓜白粉病,施用劑量為500~1500倍液,于發病前或發病初期開始應用,噴藥時要使植株莖桿、 瓜條、枝葉、葉片正反兩面各部位均勻著藥。

表5.45%木·速WP協同防治黃瓜灰霉病藥效試驗(田間) ??處理(倍) ??施藥前 ??3次施藥后 ??防效% ??顯著性 ??病瓜率% ??藥前病指 ??病瓜率% ??藥后病指 ??5% ??1% ??45%木·速WP ??500 ??5.50 ??0.68 ??13.30 ??2.88 ??81.66 ??a ??A ??1000 ??6.20 ??0.76 ??15.08 ??4.12 ??77.11 ??b ??AB ??1500 ??5.92 ??0.73 ??16.47 ??4.69 ??72.89 ??b ??BC ??50%綠色木霉 ??WP ??500 ??5.74 ??0.74 ??15.40 ??4.14 ??76.11 ??b ??AB ??1000 ??6.20 ??0.88 ??18.46 ??5.74 ??72.47 ??b ??BC ??1500 ??5.74 ??0.83 ??20.32 ??6.33 ??67.80 ??c ??C ??50%速克靈WP ??1000 ??5.73 ??0.85 ??18.20 ??4.86 ??75.78 ??b ??AB ??空白對照 ??- ??6.32 ??0.81 ??46.09 ??19.10

表6.44%木·醚WP協同防治黃瓜白粉病藥效試驗(田間) ??處理(倍) ??施藥前 ??病情指數 ??3次施藥后 ??病情指數 ??防效% ??顯著性 ??5% ??1% ??44%木·醚WP ??500 ??0.56 ??3.94 ??83.50 ??a ??A ??1000 ??0.87 ??8.09 ??78.20 ??ab ??AB ??1500 ??0.72 ??7.80 ??74.60 ??b ??ABC ??50%綠色木霉WP ??500 ??1.01 ??10.43 ??75.80 ??b ??ABC ??1000 ??0.85 ??10.37 ??71.40 ??bc ??BC ??1500 ??0.79 ??11.50 ??65.90 ??c ??C ??50%醚菌酯干懸浮 ??劑 ??3000 ??0.95 ??8.30 ??79.53 ??ab ??AB ??空白對照 ??- ??0.83 ??35.42

在田間自然條件下,病菌與寄主植株、果實接觸,綠色木霉、特異性化學藥劑與病原菌孢子菌 絲的接觸都是隨機的。某些特異性藥劑與綠色木霉混合使用,特異性化學藥劑對植物病原菌有針對 性的抑制作用,較單獨施用生防菌能更有利于生防菌定殖于植株表面,且對植物病原菌的控制機率 較單獨使用綠色木霉作用大。相信在植物病害的防治中,實現化學藥劑與綠色木霉菌制劑混合使用, 不但可以提高生防制劑的防治效果,且可部分解決綠色木霉在施用過程中容易出現的遲效性問題, 提高綠色木霉活菌制劑的防治效果,同時減少化學農藥的使用劑量及農藥的殘留,并可望取得穩定 而持久的防治效果,將是當前植物病害防治的一條新途徑。

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