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一種袋鼠花組培快繁的方法.pdf

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一種 袋鼠 花組培快繁 方法
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摘要
申請專利號:

CN200710070993.X

申請日:

20070823

公開號:

CN101112174A

公開日:

20080130

當前法律狀態:

有效性:

失效

法律詳情:
IPC分類號: A01H4/00,C12N5/04,A01G31/00 主分類號: A01H4/00,C12N5/04,A01G31/00
申請人: 浙江省農業科學院
發明人: 徐剛,汪一婷,牟豪杰,呂永平,陳劍平
地址: 310021浙江省杭州市石橋路198號
優先權: CN200710070993A
專利代理機構: 杭州九洲專利事務所有限公司 代理人: 陳繼亮
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法律狀態
申請(專利)號:

CN200710070993.X

授權公告號:

法律狀態公告日:

法律狀態類型:

摘要

本發明涉及一種袋鼠花組培快繁的方法,按如下步驟進行:1)培養基的配制,包括基本培養基和組培各階段培養基的各組分;2)外植體的選取;3)外植體預處理;4)外植體滅菌;5)誘導培養:接入誘導培養基上進行誘導培養,誘導出幼芽;6)增殖培養:轉接到增殖培養基上進行增殖培養,分化出叢;7)壯苗培養;8)生根培養:將叢芽切成單株接種到生根培養基上;9)組培苗的馴化與移栽。本發明的有益效果是:采用了適合袋鼠花組培快繁的誘導培養基、增殖培養基、壯苗培養基和生根培養基及快繁方法,芽的誘導率達90%以上,生根率達100%;移栽成活率90%以上;有效地防止了外植體和組培苗的褐變現象,促進了組培苗的分化和生長。

權利要求書

1.一種袋鼠花組培快繁的方法,其特征在于:該方法按以下步驟進行:1)、培養基的配制,包括基本培養基及分別適用于不同組培階段的培養基組成,基本培養基與各階段培養基添加物含量為:(1)基本培養基:MS或3/4MS或1/2MS,其中蔗糖或白糖20~30g/L,瓊脂7~9g/L,pH5.8;(2)誘導培養基:MS+6-BA2~5mg/L+IAA0.1~0.5mg/L+活性炭1~3g/L;(3)增殖培養基:MS+6-BA1~3mg/L+IAA0.1~0.3mg/L+活性炭1~3g/L;(4)壯苗培養基:3/4MS+6-BA0.5~2mg/L+IAA0.05~0.2mg/L+活性炭1~3g/L;(5)生根培養基:1/2MS+NAA0.1~1.0mg/L+活性碳1~3g/L;2)、外植體的選取:選擇長勢、開花性狀均表現良好,具有繁育品種典型性狀的袋鼠花植株作為外植體來源,在分蘗生長旺盛季節,晴天早晨的9點~10點取高10~20cm、健壯、無病蟲害的幼嫩側芽作為外植體材料;3)、外植體預處理:將取得的幼嫩側芽,剝去外葉,剪去上部葉片,整理成1.0~1.5cm長的外植體,在加有體積比為1%洗潔精的自來水中漂洗,然后再用自來水沖洗20~40min;4)、外植體滅菌:將預處理過的材料,先用體積比為75%的酒精浸泡0.5~1.0min,用無菌水沖洗1次,再用體積比為2%的次氯酸鈉水溶液滅菌10~15min,最后用無菌水沖洗3~5次;5)、誘導培養:將滅菌處理后的外植體放在滅菌過的濾紙上吸干水分,用解剖刀再剝去外葉,切去上部葉,留0.3~0.6cm長的外植體,接入誘導培養基上進行誘導培養,外植體誘導培養20~30天后,誘導出幼芽;6)、增殖培養:待幼芽長到1~5cm時,轉接到增殖培養基上進行增殖培養,培養30~45天分化出叢芽;每隔30~45天,將分化的叢芽切成單株再接種在增殖培養基上,再分化出叢芽;7)、壯苗培養:將分化出的叢芽切成單株接種到壯苗培養基上,20~30天后,幼苗株高生長達2~5cm;8)、生根培養:將生長達2~5cm叢芽切成單株接種到生根培養基上,20~30天后,幼苗基部長出數根根系;9)、組培苗的馴化與移栽:當生根培養20~30天時,將生長達3~7cm以上的生根幼芽,移至常溫下適應3~5天后,打開蓋子再適應3~5天,洗清根部培養基后移栽入裝有泥炭:珍珠巖:蛭石的體積比為4∶2∶1基質的穴盤中,最后澆一次透水。2.根據權利要求1所述的袋鼠花組培快繁的方法,其特征在于:所述的外植體滅菌是外植體預處理后洗凈的幼芽,先在含有體積比為10%的檸檬酸和體積比為15%的抗壞血酸的混合溶液中浸泡0.5~1小時,再用體積比為75%的酒精浸泡0.5~1.0min,用無菌水沖洗1次,再用體積比為2%的次氯酸鈉水溶液滅菌10~15min,最后用無菌水沖洗3~5次。3.根據權利要求1所述的袋鼠花組培快繁的方法,其特征在于:所述的培養基,包括基本培養基和組培各階段培養基的各組分與每升所含重量為:(1)基本培養基:MS或3/4MS或1/2MS,其中蔗糖或白糖20~30g/L,瓊脂7~9g/L,pH5.8;(2)誘導培養基:MS+6-BA3mg/L+IAA0.1mg/L+活性炭3g/L;(3)增殖培養基:MS+6-BA2mg/L+IAA0.1mg/L+活性炭1g/L;(4)壯苗培養基:3/4MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.1mg/L+活性炭1g/L;(5)生根培養基:1/2MS+NAA0.3mg/L+活性碳1g/L。4.根據權利要求1或3所述的袋鼠花組培快繁的方法,其特征在于,所述的各組培階段的培養條件是:在誘導培養階段:溫度22±2℃、暗培養;在增殖培養、壯苗培養和生根培養階段:溫度25±2℃、光照12h/d、光照強度為2000lx~3000lx。

說明書

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技術領域

本發明涉及植物組織培養技術領域,主要是一種袋鼠花組培快繁的方法。

背景技術

袋鼠花(Anigozanthos?flavidus)是血皮草科(Haemodoaceae)的溫帶多年生草本植物, 為澳洲的特有種。其株高多為1米,花型獨特,整朵花呈奇妙的爪形,紅色(黃色)花莖上 綻放亮綠色花瓣,如天鵝絨般美麗,是一種極佳的切花,也可園植或盆栽,是近年來才引進 的新型花卉,具有較好的市場前景。但是,由于種源有限、種子壽命較短、分株繁殖系數不 高,且易受季節等因素的影響,不利于種苗的大規模繁殖。

浙江省農業科學院從從澳大利亞引進袋鼠花新品種,擬通過植物組織培養技術大量繁殖 種苗,然后出口歐美國家。同時還可以在國內試種后加以推廣。采用植物組織培養方法可以 在短期內快速繁殖多種植物,不僅繁殖率高,且因為其是無性繁殖,可以保持原繁殖母株的 優良性狀,近年來在生產上應用越來越廣。但是不同的植物利用植物組織培養方法繁殖種苗 的難易程度是不同的,在袋鼠花的前期組培試驗中,出現外植體接種污染率高、外植體易褐 化、組培苗易褐化、移栽成活率低等問題,使其無法實現大規模工廠化生產。

發明內容

本發明要解決上述現有技術的缺陷,提供一種袋鼠花組培快繁的方法。

本發明解決其技術問題采用的技術方案。這種袋鼠花組培快繁的方法,按如下步驟進行:

1)、培養基的配制,包括基本培養基及分別適用于不同組培階段的培養基組成,基本培 養基與各階段培養基添加物含量為:

(1)基本培養基:MS或3/4MS或1/2MS,其中蔗糖或白糖20~30g/L,瓊脂7~9g/L, pH5.8;

(2)誘導培養基:MS+6-BA2~5mg/L+IAA0.1~0.5mg/L+活性炭1~3g/L;

(3)增殖培養基:MS+6-BAl~3mg/L+IAA0.1~0.3mg/L+活性炭1~3g/L;

(4)壯苗培養基:3/4MS+6-BA0.5~2mg/L+IAA0.05~0.2mg/L+活性炭1~3g/L;

(5)生根培養基:1/2MS+NAA0.1~1.0mg/L+活性碳1~3g/L;

2)、外植體的選取:選擇長勢、開花性狀均表現良好,具有繁育品種典型性狀的袋鼠花 植株作為外植體來源。在分蘗生長旺盛季節,晴天早晨的9點~10點取高10~20cm、健壯、 無病蟲害的幼嫩側芽作為外植體材料;

3)、外植體預處理:將取得的幼嫩側芽,剝去外葉,剪去上部葉片,整理成1.0~1.5cm 長的外植體,在加有體積比為1%洗潔精的自來水中漂洗,然后再用自來水沖洗20~40min;

4)、外植體滅菌:將預處理過的材料,先用體積比為75%的酒精浸泡0.5~1.0min,用無 菌水沖洗1次,再用體積比為2%的次氯酸鈉水溶液滅菌10~15min,最后用無菌水沖洗3~5 次;

5)、誘導培養:將滅菌處理后的外植體放在滅菌過的濾紙上吸干水分,用解剖刀再剝去 外葉,切去上部葉,留0.3~0.6cm長的外植體,接入誘導培養基上進行誘導培養,外植體誘 導培養20~30天后,誘導出幼芽。

6)、增殖培養:待幼芽長到1~5cm時,轉接到增殖培養基上進行增殖培養,培養30~ 45天分化出叢芽;每隔30~45天,將分化的叢芽切成單株再接種在增殖培養基上,再分化 出叢芽;

7)、壯苗培養:將分化出的叢芽切成單株接種到壯苗培養基上,20~30天后,幼苗株高 生長達2~5cm

8)、生根培養:將生長達2~5cm叢芽切成單株接種到生根培養基上,20~30天后,幼 苗基部長出數根根系;

9)、組培苗的馴化與移栽:當生根培養20~30天時,將生長達3~7cm以上的生根幼芽, 移至常溫下適應3~5天后,打開蓋子再適應3~5天,洗清根部培養基后移栽入裝有泥炭∶珍 珠巖∶蛭石的體積比為4∶2∶1基質的穴盤中,最后澆一次透水。

本發明采用的優化培養基,包括基本培養基及分別適用于不同組培階段的培養基組成, 基本培養基與各階段培養基添加物含量為:

(1)基本培養基:MS或3/4MS或1/2MS,其中蔗糖或白糖20~30g/L,瓊脂7~9g/L,pH5.8;

(2)誘導培養基:MS+6-BA3mg/L+IAA0.1mg/L+活性炭3g/L;

(3)增殖培養基:MS+6-BA2mg/L+IAA0.1mg/L+活性炭1g/L;

(4)壯苗培養基:3/4MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.1mg/L+活性炭1g/L;

(5)生根培養基:1/2MS+NAA0.3mg/L+活性碳1g/L。

本發明采用的外植體滅菌是外植體預處理后洗凈的幼芽,先在含有體積比為10%的檸檬 酸和體積比為15%的抗壞血酸的混合溶液中浸泡0.5~1小時,再用體積比為75%的酒精浸 泡0.5~1.0min,用無菌水沖洗1次,再用體積比為2%的次氯酸鈉水溶液滅菌10~15min, 最后用無菌水沖洗3~5次。

本發明采用的各組培階段的培養條件是:在誘導培養階段:溫度224-2℃、暗培養;在 增殖培養、壯苗培養和生根培養階段:溫度25±2℃、光照12h/d、光照強度為2000lx~3000lx。

本發明的有益效果是:

1)、提出的袋鼠花組培快繁的方法,采用了適合袋鼠花組培快繁的誘導培養基、增殖培 養基、壯苗培養基和生根培養基及快繁方法,芽的誘導率達90%以上;芽的增殖率每個培養 周期達5倍以上,年組培苗生產能力可達100萬苗以上(一年為8個培養周期);經增設的壯 苗培養基培養后成苗生長速度加快,20~30天苗高可達2~5厘米,生根率達100%;移栽成 活率90%以上。

2)、該方法由于外植體采用了檸檬酸和抗壞血酸混合溶液中浸泡預處理,在誘導培養階 段采用暗培養,在培養的各個階段在培養基中添加了活性炭,有效地防止了外植體和組培苗 的褐變現象,促進了組培苗的分化和生長。

3)、提出的組織培養快速繁殖方法得到的袋鼠花組培苗,遺傳性狀一致,克服了常規繁 殖系數低的缺點。

具體實施方式

通過以下實施例對本發明作進一步的詳細說明,但本發明的內容并不局限于此。

實施例1:本實施例1中的這種袋鼠花組培快速繁殖方法,按如下步驟進行:

1)、培養基的配制,包括基本培養基及分別適用于不同組培階段的培養基組成,基本培 養基與各階段培養基添加物含量為:

(1)基本培養基:MS或3/4MS或1/2MS,其中蔗糖或白糖20~30g/L,瓊脂7~9g/L, pH5.8;

(2)誘導培養基:MS+6-BA2~5mg/L+IAA0.1~0.5mg/L+活性炭1~3g/L

(3)增殖培養基:MS+6-BAl~3mg/L+IAA0.1~0.3mg/L+活性炭1~3g/L

(4)壯苗培養基:3/4MS+6-BA0.5~2mg/L+IAA0.05~0.2mg/L+活性炭1~3g/L

(5)生根培養基:1/2MS+NAA0.1~1.0mg/L+活性碳1~3g/L

2)、外植體的選取:選擇長勢、開花性狀均表現良好,具有繁育品種典型性狀的袋鼠花 植株作為外植體來源。在分蘗生長旺盛季節,晴天早晨的9點~10點取高10~20cm、健壯、 無病蟲害的幼嫩側芽作為外植體材料。

3)、外植體預處理:將取得的幼嫩側芽,剝去外葉,剪去上部葉片,整理成1.0~1.5cm 長的外植體,在加有體積比為1%洗潔精的自來水中漂洗,然后再用自來水沖洗20~40min;

4)、外植體滅菌:將預處理過的材料,先用體積比為75%的酒精浸泡0.5~1.0min,用無 菌水沖洗1次,再用體積比為2%的次氯酸鈉水溶液滅菌10~15min,最后用無菌水沖洗3~5 次;

5)、誘導培養:將滅菌處理后的外植體放在滅菌過的濾紙上吸干水分,用解剖刀再剝去 外葉,切去上部葉,留0.3~0.6cm長的外植體,接入誘導培養基上進行誘導培養,外植體誘 導培養20~30天后,誘導出幼芽。

6)、增殖培養:待幼芽長到1~5cm時,轉接到增殖培養基上進行增殖培養,培養30~ 45天分化出叢芽;每隔30~45天,將分化的叢芽切成單株再接種在增殖培養基上,再分化 出叢芽;

7)、壯苗培養:將分化出的叢芽切成單株接種到壯苗培養基上,20~30天后,幼苗株高 生長達2~5cm;

8)、生根培養:將生長達2~5cm叢芽切成單株接種到生根培養基上,20~30天后, 幼苗基部長出數根根系;

9)、組培苗的馴化與移栽:當生根培養20~30天時,將生長達3~7cm以上的生根幼芽, 移至常溫下適應3~5天后,打開蓋子再適應3~5天,洗清根部培養基后移栽入裝有泥炭∶珍 珠巖∶蛭石的體積比為4∶2∶1基質的穴盤中,最后澆一次透水。

采用的外植體滅菌是外植體預處理后洗凈的幼芽,先在含有體積比10%的檸檬酸和體積 比15%的抗壞血酸的混合溶液中浸泡0.5~1小時,再用體積比為75%的酒精浸泡0.5~ 1.0min,用無菌水沖洗1次,再用體積比為2%的次氯酸鈉水溶液滅菌10~15min,最后用無 菌水沖洗3~5次。

該實施例中各組培階段的培養條件是:在誘導培養階段:溫度22±2℃、暗培養;在增 殖培養、壯苗培養和生根培養階段:溫度25±2℃、光照12h/d、光照強度為2000lx~3000lx。

實施例2:本實施例2中的這種袋鼠花組培快速繁殖方法,按如下步驟進行:

1)、培養基的配制,包括基本培養基及分別適用于不同組培階段的培養基組成,基本培 養基與各階段培養基添加物含量為:

(1)基本培養基:MS或3/4MS或1/2MS,其中蔗糖或白糖20~30g/L,瓊脂7~9g/L,pH5.8;

(2)誘導培養基:MS+6-BA3mg/L+IAA0.1mg/L+活性炭3g/L

(3)增殖培養基:MS+6-BA2mg/L+IAA0.1mg/L+活性炭1g/L

(4)壯苗培養基:3/4MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.1mg/L+活性炭1g/L

(5)生根培養基:1/2MS+NAA?0.3mg/L+活性碳1g/L。

2)、外植體的選取:選擇長勢、開花性狀均表現良好,具有繁育品種典型性狀的袋鼠花 植株作為外植體來源。在分蘗生長旺盛季節,晴天早晨的9點~10點取高10~20cm、健壯、 無病蟲害的幼嫩側芽作為外植體材料;

3)、外植體預處理:將取得的幼嫩側芽,剝去外葉,剪去上部葉片,整理成1.0~1.5cm 長的外植體,在加有體積比為1%洗潔精的自來水中漂洗,然后再用自來水沖洗20~40min;

4)、外植體滅菌:將預處理過的材料,先用體積比為75%的酒精浸泡0.5~1.0min,用無 菌水沖洗1次,再用體積比為2%的次氯酸鈉水溶液滅菌10~15min,最后用無菌水沖洗3~5 次;

5)、誘導培養:將滅菌處理后的外植體放在滅菌過的濾紙上吸干水分,用解剖刀再剝去 外葉,切去上部葉,留0.3~0.6cm長的外植體,接入誘導培養基上進行誘導培養,外植體誘 導培養20~30天后,誘導出幼芽。

6)、增殖培養:待幼芽長到1~5cm時,轉接到增殖培養基上進行增殖培養,培養30~ 45天分化出叢芽;每隔30~45天,將分化的叢芽切成單株再接種在增殖培養基上,再分化 出叢芽;

7)、壯苗培養:將分化出的叢芽切成單株接種到壯苗培養基上,20~30天后,幼苗株高 生長達2~5cm;

8)、生根培養:將生長達2~5cm叢芽切成單株接種到生根培養基上,20~30天后, 幼苗基部長出數根根系;

9)、組培苗的馴化與移栽:當生根培養20~30天時,將生長達3~7cm以上的生根幼芽, 移至常溫下適應3~5天后,打開蓋子再適應3~5天,洗清根部培養基后移栽入裝有泥炭∶珍 珠巖∶蛭石的體積比為3∶1∶1基質的穴盤中,最后澆一次透水。

采用的外植體滅菌是外植體預處理后洗凈的幼芽,先在含有10%的檸檬酸和15%的抗壞 血酸的混合溶液中浸泡0.5~1小時,再用體積比為75%的酒精浸泡0.5~1.0min,用無菌水沖 洗1次,再用體積比為2%的次氯酸鈉水溶液滅菌10~15min,最后用無菌水沖洗3~5次。

該實施例中各組培階段的培養條件是:在誘導培養階段:溫度22±2℃、暗培養;在增 殖培養、壯苗培養和生根培養階段:溫度25±2℃、光照12h/d、光照強度為2000lx~3000lx。

除上述實施例外,本發明還可以有其他實施方式。凡采用等同替換或等效變換形成的技 術方案,均落在本發明要求的保護范圍。

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